文档介绍：上海交通大学
硕士学位论文
PPARγ活化对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞趋化因子表达的干预
研究
姓名:章慧娣
申请学位级别:硕士
专业:临床医学内科学(肾脏病学)
指导教师:王伟铭
20070420
上海交通大学医学院硕士学位论文
PPARγ活化对 TGF-β1 诱导肾小管上皮细胞
趋化因子表达的干预研究
摘要

目前普遍认为,肾间质炎症和纤维化与肾脏病进展的关系更加密切,肾小管上
皮细胞是介导肾间质炎症和纤维化主要的效应细胞。转化生长因子β1(TGF-β1)被
认为是致肾间质损伤最重要的细胞因子之一,其致纤维化作用及其下游因子和相关
信号转导通路已有较多研究,但其在肾间质病变中如何积极参与肾间质炎症发展的
研究报道尚不多。近年来,研究者认识到趋化因子在肾间质损伤中的重要性,它们
主要介导肾脏炎症发生和进展阶段炎症细胞的招募和激活。过氧化物酶体增殖物激
活受体γ(PPARγ)是核转录因子,激活后通过结合靶基因启动子区的过氧化物酶
体增殖物反应元件(PPRE)调节下游基因的转录。其激活后的生物学效应广泛,包
括调控炎症反应。因此,本课题利用实时荧光定量 PCR 技术和 ELISA 方法研究
TGF-β1 对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子的表达影响,并进一步研究 PPARγ活
化在该过程中的干预作用。
第一部分研究结果显示 TGF-β1 能诱导人肾小管上皮细胞(HK-2 细胞)趋化因
子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、RANTES 的表达上调,且呈
剂量和时间依赖效应。2 ng/ml TGF-β1 作用 24h 可诱导 MCP-1 和 IL-8 mRNA 明显
升高,5ng/ml TGF-β1 作用时达高峰。TGF-β1 作用后细胞 MCP-1 蛋白分泌升高晚于
mRNA 的变化,24h 明显升高,36h 达高峰,48h 仍维持在较高水平。IL-8 蛋白分泌
升高同样迟于 mRNA 的表达,24h 达高峰并持续至 48h 未见明显下降。TGF-β1 可
诱导 RANTES mRNA 明显升高,RNATES mRNA 表达 2h 时明显升高,24h 达高峰,
此后至 48h 时仍维持在较高水平。RNATES 蛋白基础分泌水平极低,TGF-β1 作用
HK-2 细胞 24h 时 RNATES 蛋白分泌开始升高,36 小时达到高峰,至 48h 仍维持在
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高水平。上述结果表明,TGF-β1 诱导能明显上调趋化因子 MCP-1、IL-8 和 RANTES
的 mRNA 表达和蛋白分泌。因此,有效干预 TGF-β1 诱导的趋化因子的表达可能为
减轻肾间质炎症的途径之一。
本研究第二部分观察 PPARγ天然激动剂 15d-PGJ2 和合成激动剂曲格列酮
(TGL)对 TGF-β1 诱导的趋化因子 MCP-1 和 IL-8 表达的干预作用。首先通过 LDH
毒性试验选择 15d-PGJ2 和 TGL 的作用最高浓度。研究选择 0、、1、、5µM
15d-PGJ2 和 0、、1、µM TGL 作为干预浓度,预处理 2h,加入 5ng/mlTGF-β1
分别作用 12h 或 24h 收获细胞和上清液。结果显示,5µM 15d-PGJ2 和 µM TGL
不影响 HK-2 细胞 MCP-1 和 IL-8 mRNA 基础表达和蛋白分泌。TGF-β1 作用 12h 和
24h 时,µM 和 5µM 15d-PGJ2 及 µM TGL 均能有效干预 TGF-β1 诱导的 MCP-1
mRNA 表达和蛋白的分泌(p<)。IL-8 的表达与 MCP-1 相似,µM 和 5µM
15d-PGJ2 能显著抑制 TGF-β1 诱导的 IL-8 mRNA 表达,但 TGL 干预作用在 TGF-β1
诱导 12h 时不明显,TGF-β1 诱导 24h 时 µM TGL 能显著抑制 IL-8 mRNA 表达(p
<),而 5µM 15d-PGJ2 和 µM TGL 均能显著下调 TGF-β1 诱导的 IL-8 蛋白分
泌(p<)。上述结果表明,PPARγ激动剂 15d-PGJ2 和 TGL 作用,即 PPARγ的
活化均能有效干预 TGF-β1 诱导的肾小管上皮细胞趋化因子 MCP-1 和 IL-8 的表达,
具有有效干预肾间质炎症作用。
为明确 PPARγ激动剂的干预作用是否通过依赖 PPARγ方式的干预机制,我们
构建了