文档介绍：神经元样细胞对体外培养成肌干细胞功能活性的影响称人体解剖与组织胚胎学学位申请人专名刘幸卉指导教师廖华教授答辩委员会主席答辩委员会成员汪华侨教授吴增晖教授琳教授欧阳钧教授张美超副教授论文评阅人郭家松教授田雪梅教授业张广州课题来源:国家自然科学基金面上项目嗪牛国家自然科学基金面上项目嗪牛南方医科大学级硕士学位论文
神经元样细胞对体外培养成肌干细胞功能活性的影响硕士研究生:刘幸卉指导教师:廖华教授摘要骨骼肌组织工程的建立为各种骨骼肌疾病∮Q涣肌⒓顾栊约∥醯提供了治疗希望,也使整形外科治疗创伤、肿瘤切除、失神经支配所致的肌组织缺失进行外科重建成为可能【疲矶嘌д咧铝τ诠趋兰〉奶逋夤菇ê吞娲究,试图创建功能化的肌组织。经过多年的探索和努力,一些权威的研究组取得了相当的成绩,不断推进骨骼肌组织工程的研究进展:炔捎媒涸和基质成功构建三维骨骼肌组织,并对构建组织施加机械刺激,确保体外培养肌组织的形成、分化和收缩功能形成;和蛱剿鞒鋈趋兰组织的自组装模式,作者称其构建肌组织为诤嵯虻绱碳な本哂谐中的兴奋性和收缩功能。德国的研究组进行了成肌细胞与纤维蛋白三维支架的复合培养,获得了具有极性分化功能的多核肌管【】。然而,体外条件下进行骨骼肌组织的构建仍面对诸多挑战,尤其在神经化方面。在体研究肌肉的神经支配十分困难,目前研究人员一般采用将成肌细胞与神经元细胞体外共培养来研究成肌细胞与神经细胞的相互作用,并取得了一系列进展。比较经典的是从动物胚胎的脊髓获取神经元细胞进行纯化,然后共培养。】共培养小鼠成肌细胞和胚胎大鼠脊髓,发现共培养组的分化肌管表达更高密度的乙酰胆碱受。,肌管具有更强的导电能力。冉ù鼠的神经细胞和肌细胞直接联合培养,发现两者之间形成了神经肌肉接头。神硕士学位论文体
经末梢及各种神经递质的缺乏不利于分化肌管的长期存活和收缩功能的维持,在体外条件下成肌细胞与外周神经元的相关性是构建神经化骨骼肌组织的关键因素。上述研究明确了神经元细胞对成肌干细胞的生物学影响,但由于原代分离培养的神经元细胞对体外生存环境要求较高,体外成肌细胞的存活、增殖及分化环境很难同时满足原代分离神经元的生长要求,为体外骨骼肌组织工程构细胞是褐家鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系起源于神经嵴,易获得,便于体外培养,细胞增殖能力强,表达神经生长因子,受体蚿虼薔能与其受体结合使痳//藕磐活化【,使其停止增殖,细胞表型发生明显改变,获得神经元特性,如长出细胞突起、形成突触样结构、具有电兴奋特性等。细胞未分化时合成儿茶酚胺,在淖饔孟驴梢院铣梢阴5ḿ畈⑶页こ錾窬唤峁埂。广泛应用于神经系统疾病的体外研究。周涛【】等的研究表明,细胞能与原代神经元之间形成突触连接,康确⑾諲诱导分化的细胞之间可以形成突触康冉盏挤只腜赴胄募∠赴才嘌⑾諴赴可作为体外再造心肌神经支配研究模型的供体细胞。】等的研究发现骨骼肌纤维与细胞共培养时,肌肉细胞中的慢肌球蛋白轻链暮铣伤皆胞与赴奶逋夤才嘌跋嗷サ墓δ苡跋欤壳吧形捶⑾窒喙氐奈南妆道。鉴于上述研究背景,本研究尝试将已经分化的细胞与成肌细胞进行共培养,观察其对成肌细胞是否具有支配关系,为构建组织工程骨骼肌提供一种新的方法和思路。摘要建的开展带来一定困难。样结构。王静【高。】等也证实赴梢杂跋旃趋兰〉姆只獭S泄豍Ⅱ
第一章细胞的分化培养及鉴定【目的】用訮赴挠盏挤只ü庖哂ü馊旧ü鄄霳对细胞【方法】胎牛血清的/耆嘌种灿谂嘌磕冢%嘌渲培养将培养生长状态良好的细胞按/密度接种于预先置有小盖玻片的装逯校赴锏ズ螅尤肱ǘ任疞培养基对细胞进行诱导分化培养,换液,相差显微镜下观察细胞形态。分别在分化和后进行免疫荧光检测。【结果】未分化的细胞呈圆形、短梭形或三角形,有的细胞两端有突起伸出,有的较长,其上还有小的突起,类似神经元轴突。换含有呐嘌汉螅胞伸出多条树突状突起,长短不一,突起数目不等。神经元突起细长,大体形态与成熟神经元相似。培养螅赴湎嗷チ咏恢赏础<绦嘌至第,细胞进一步分化。【结论】细胞之间相互连接交织成网状,说明哂写俳鳳赴只淖饔茫神经元细胞微管相关蛋白.,巧窬5特异性标志物,主要存在于神经元的胞体和树突中,可作为神经元的标志蛋白细胞免疫荧光阳性表达表明在挠盏枷拢琍赴丫只我们的主要研究内容的诱导分化作用。细胞常规复苏后用含/的青霉素、痬牧疵顾睾腄疐较成熟的神经元细胞。硕士学位论文:,
【目的】建立细胞和赴鸗共培养体系,通过流式细胞术检测赴芷冢芯縋赴欠窀扇臗细胞的体外增殖。【方法】细胞培养分组:瞻锥哉兆椋篊细胞单独培养;笛樽椋篊细胞与已分化的细胞共培养;跣远哉兆椋篊细胞与未分化的细胞共培养;以上共培养组均为∈夷诮又諴赴装内接种赴赴ǘ任畂.×疞的赴海赴壁后,将已接种的∈孔径为湃肓装褰泄才嘌二者接种细胞的比例为,实验组加入浓