文档介绍：辽宁师范大学
硕士学位论文
五指山小型猪精原干细胞体外分离与培养方法的研究
姓名:贾映辉
申请学位级别:硕士
专业:动物学
指导教师:金梅;李奎
20090501
不表达藁颍没蚴窍蚓赴只曛荆馑得魇笛橹谢竦玫腟虾逯干叫⌒椭砭赴逋夥掷胗肱嗝Х椒ǖ难芯精原于细胞琒是雄性生殖系于细胞,位于睾丸的曲细精管基膜上,既具有自我更新潜能,又具有定向分化潜能,是自然状态下出生后动物体内在整个生命过程中进行自我更新并能将基因传递至子代的唯一成体干细胞。已有诸多研究对小鼠等模式动物的的分离、培养、增殖以及分化进行了研究。利用作为宿主细胞制作转基因动物也已经成为~条新的转基因技术途径被广泛关注和研究。德是家畜的分离培养及分子标记等研究迸不深入,迄今为止未获得纯的群体,也未有成功建系的报道。本研究主要进行五指山小型猪的分离、培养和分子特征的鉴定,为制作转基因动物打下基础。⑹笛橐晕逯干叫⌒椭砦O赴丛床牧希~日龄,二月龄,四月龄的五指山猪睾丸做切片观察,发现相比之下同龄的曲细精管中细胞形态比较单一,生精上皮还没有进入生精蠲甥,精原干细胞比较多,所以选择此时期的雄性五指出小型猪的睾丸进行试验。⑽A颂教植煌茄愣許鲋车挠跋欤臼笛橐許、、猪赴魑K茄憬斜冉吓嘌⒆钪杖范ㄒ許细胞制备饲养层。⒈臼笛椴扇×讲矫阜ㄏ和枳橹竦玫ハ赴海鵾:导的单细胞悬液经ê吞诜盅》街址椒ㄈコ酉赴琍法回收精原细胞纯度达到%以上,差速贴壁法回收的精原细胞纯度%左右。差速贴壁法的细胞活力更大一些。⒈臼匝椴慰夹∈缶谙赴て谂嘌姆椒ḿ右愿慕玫搅私侠硐氲闹培养体系。因为考虑到高浓度血清会加快体细胞增殖,我们没有采用之前国内外经常使用得的%呐嘌逑担媸翘砑恿%的⑶以谂嘌逑的添加后,促进了猪的增殖,对精原细胞克隆形态的维持和体积的增⒎掷氲木上赴赴涸谒茄闵闲纬煽锹⊙赴糯兀⒖纱ù芗续增殖,在体外培养最长达两个月;免疫鉴定结果发现五指山小型猪表达、籰、—约癘扔谟О卣鞣肿樱检测证实多个干细胞多潜能性标志基因的表达,同时发现实验获得的的保持了未分化状态。本研究在,和添加/的培养体系下体外培养猪精原干细胞,维持猪的在体外存活增殖两个月。同时,对的分子特征鉴定也为进行高效免疫分选提供参考,为将来结合移植技术等开展深入研究,利爱转基嚣技术生产转基因猪提供了新的途径。关键词:精原干细胞:贴壁分选:分子特征:免疫鉴定:转基因摘要大都有促进作用。岷蟂细胞饲养层痬
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缩略词中英文对照表五指山小型猪精原干细胞体外分离与培养方法的研究
学位论文作者签名:√懈指导溯躲厘毖学位论文独创性声明学位论文版权的使用授权书除特别加以标注和致谢的地方外,不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究本人承诺:所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中成果,其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助,均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定,及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘,允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文,并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名:签名日期:年月日
第一章前言精原干细胞琒是指位于曲精细管基膜上的,既能够自我更新维持自身群体数量恒定,又能够定向的分化产生精母细胞的一类原始的精原细胞。精原干细胞是雄性成体内惟一可复制的二倍体的永生细胞。精原干细胞在一生中都保持着分裂和增殖的能力。个体性成熟以后,精原干细胞能够源源不断的提供子细胞继而发育为精予。精原干细胞的体内发育内环境、⒂诨肪睾丸是动物精原干细胞增殖发育的场所,也是分化发育成熟精子的器官。在高等脊椎动物睾丸呈卵圆形或椭圆形成对存在。哺乳动物睾丸一般呈圆形或椭圆形,大多物种的睾丸悬垂位于体腔外阴囊中,猪、马睾丸贴近腹壁,羊和牛的睾丸悬垂于腹下。睾丸间质是指曲细精管之间的疏松结缔组织,主要由成纤维细胞、睾丸间质细胞等构成。构成睾丸的绝大部分是曲细精管。在不同物种中,曲细精管在睾丸中所占得比例很不相同。曲细精管支持细胞和生精细胞两类形态结构和功能不同的细胞组成瞳9芮黄骄本苤茏橹裨掀じ叨精管的界膜包括三层,从外向内依次为成纤维细胞层,肌样细胞层和基膜∞’。基膜一般也会分为多层猪分两层,羊和牛的基膜可达悖淼幕ひ话惴植悴幻显。基膜将生精上皮细胞附着在结缔组织