文档介绍:免疫细胞功能检测技术
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一 淋巴细胞的功能检测
淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应;体外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定
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淋巴细胞
T细胞(负责细胞免疫功能)
B细胞(执行体液免疫功能)
NK细胞(非特异性免疫作用)
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一、T细胞功能的检测
T细胞增殖试验
T细胞分泌功能测定
T细胞介导的细胞毒试验
体内试验
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(一)T淋巴细胞增殖试验
1. 原理:
淋巴细胞
DNA合成
分化
母细胞
刺激物
细胞变大
细胞浆扩大
空泡
核仁明显
核染色质疏松
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未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞
未转化的淋巴细胞
淋巴母细胞 过渡型
细胞大小(直径μm)
12~20
12~16
6~8
核大小、染色质
增大、疏松
增大、疏松
不增大、密集
核仁
清晰、1~4个
有或无
无
有丝分裂
有或无
无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
极少、天青色
浆内空泡
有或无
有或无
无
伪足
有或无
有或无
无
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2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物:
PHA ------T细胞
ConA -------T细胞
PWM -------T、 B细胞
LPS -------B细胞
特异性刺激物:
异种抗原
同种组织抗原
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3. 检测方法
形态法:刺激物 淋巴细胞(4-6天) 母细胞化
同位素法:PHA 淋巴细胞(54h)
DNA合成期 + 3HTdR掺入
收集细胞
 
检测β射线
测定细胞内的3H-TdR
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(1)形态学检查法
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方法学评价:
优点:形态学方法简便易行,普通光学显微镜便能观察结果,适于基层实验室应用。
缺点:是依靠肉眼观察形态学变化,判断结果易受主观因素影响,重复性和准确性较差。
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