文档介绍：免疫细胞功能检测技术
第一页，讲稿共三十八页哦
淋巴细胞
T细胞（负责细胞免疫功能）
B细胞（执行体液免疫功能）
NK细胞（非特异性免疫作用）
第二页，讲稿共三十八页哦
一、T细胞功能的检测
T细胞增殖试验
T细胞分主观因素影响，重复性和准确性较差。
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培养液
3H-TdR
PHA
淋巴细胞
全血
分层液
离心
过滤
测量放射性
（2）3H-TdR掺入法
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优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。
缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。
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培养液
3H-TdR
PHA
淋巴细胞
全血
分层液
离心
过滤
测量放射性
MTT
测吸光度
(3) MTT 比色法
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(二) T细胞分泌功能测定
体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。
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（三）T细胞介导的细胞毒试验
：
靶细胞抗原
T细胞
观察杀伤活力
致敏CTL
靶细胞
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形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞计数残留肿瘤细胞

意义：
肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力
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图15-2 T细胞细胞毒试验示意图
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靶细胞
51Cr
洗涤
去除游离的51Cr
效应细胞
测量上清液中释放的51Cr
混合培养4-6小时
51Cr释放法
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(四) 体内试验
特异性抗原皮肤试验
PHA皮肤试验
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二、B细胞功能检测
B细胞增殖能力的试验
溶血空斑试验
B细胞抗体形成功能的检测
体内试验
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(一)B细胞增殖能力的试验
抗IgM
细菌脂多糖
SAC的SPA
B细胞增殖
形态学
3H－TdR掺入法
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(二) 溶血空斑试验
1. 原理：
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2. 方法学：
经典溶血空斑形成试验
被动溶血空斑试验
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3．临床应用与评价
溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响
评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。
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(三)　 B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法ELISPOT
：
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2．应用与方法学评价：
该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。
优点：
稳定、特异、抗原用量少；
可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
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(四)　体内试验
体内抗体产生的特异性抗原有白喉类***、破伤风类***、多价肺炎链球菌菌苗等。
将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。
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染色计数
离心取上清
测LDH或AKP
离心取沉淀
测活细胞荧光
测发光强度
测CPM值
形态法
酶释法
荧光法
同位素法
化学发光法
三、NK细胞活性测定
靶细胞溶解
常用靶细胞: K562细胞株
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二吞噬细胞功能检测技术
按其形态大小分为两类：
大吞噬细胞—单核-吞噬细胞系统
小吞噬细胞—中性粒细胞
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一、中性粒细胞功能的检测
细胞趋化功能的检测
吞噬和杀菌功能的检测
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(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
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2. 方法：
琼脂糖平板法
滤膜渗透法（Boyden 小室法）
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(二)吞噬和杀菌功能测定
1．显微镜检查法：
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2. 溶菌法
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NBT还原试验
原理：
N-N-
C + H+
N=N-R-
N-NH2
C
N=NH
四氮唑基（淡黄色）
甲臜（紫黑色）
3．NBT还原试验
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