文档介绍：基因工程复****试题(名词解释和问答仅供参考) 名词解释: 1、基因工程( ic engineering ): 就是在分子水平上,提取(或合成)不同生物的遗传物质(基因) ,在体外切割,再和一定的载体拼接重组,然后把重组的 DNA 分子引入细胞或生物体内,使这种外源 DNA (基因)在受体细胞中进行复制与表达,按人们的需要繁殖扩增基因或生产不同的产物或定向地创造生物的新性状,并能稳定地遗传给下代。 2、载体(vector) :基因工程中,携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。 3、限制性核酸内切酶( restriction endonuclease ): 定义:是一类能识别双链 DNA 分子中的特定核苷酸序列,并由此切割 DNA 双链结构的核酸内切酶。主要从原核生物中分离纯化出来。 4、1) 同裂酶( isoschizomers ): 来源不同, 识别位点和切割位点均相同的限制性内切酶。即同裂酶产生同样的切割, 形成同样的末端。同裂酶对识别序列的***化状态有不同的限制性反应。2) 同尾酶( isocaudamer ): 来源不同, 识别序列也不相同, 但切出的 DNA 片段具有相同的末端序列。 3 )同位酶: 识别序列相同,但切割位点不同。 5、酶活性单位:1 个酶活性单位就是指 1min 能转化 1mmol 底物的酶量。 6、 DNA 连接酶:能催化双链 DNA 片段靠在一起的 3′羟基末端和 5′端磷酸基团末端之间形成的磷酸二酯键,使两末端连接的一种核酸酶。 7、 DNA 聚合酶: 作用是指在引物和模板的存在下,把脱氧核糖核苷酸( dNTP )连续地加到引物链的 3’– OH 末端,催化核苷酸的聚合作用。 8、 DNA 连接酶能够封闭双螺旋 DNA 骨架上的缺口, 但不能封闭裂口。缺口( nick ): 即在双链 DNA 的某一条链上两个相邻核苷酸之间失去一个磷酸二酯键所出现的单链断裂; 9、常用连接酶: DNA 连接酶、 T4 DNA 连接酶( 常用)。既能进行粘性末端的连接, 又能进行平末端的连接,但 DNA 连接酶进行平末端连接的效率低。 10、 DNA 连接酶的连接条件: 必须是两条双链 DNA 、一条链的 3‘末端有游离的羟基( -OH ), 而另一条链的 5’端具有一个磷酸基团( -P) 、需要能量( ATP 或 NAD+ )。 11、 T4 多核苷酸激酶: 是一种磷酸化酶, 可将 ATP 的磷酸基团转移到 DNA 或 RNA 的5‘末端。 1)5‘加磷酸基团。对于缺乏 5‘磷酸的 DNA 或合成接头进行磷酸化。 2 )末端标记。 12、末端转移酶 TDT 来源: 小牛胸腺活性: 不依赖模板的 DNA 聚合酶, 能催化 dNTP 掺入 DNA 3′-OH 末端。当反应液中只有一种脱氧核苷酸时, 可形成仅有一种核苷酸组成的3′尾巴, 称之为同聚物加尾。功能:1) 主要用于给外源 DNA 片段及载体分子加上互补的同聚物尾巴,便于连接。 2 )末端标记 13、碱性磷酸酶: 细菌碱性磷酸酶( bacterial alkaline phosphatase , 简称 BAP )、小牛肠碱性磷酸酶( calf intestinal alkaline phosphatase ,简称 CIP )特性:催化除去 DNA 或