文档介绍：7. 维生素的测定
维生素A的测定——比色法
维生素C(抗坏血酸)的测定
(1)原理
在氯仿溶液中,维生素A与三氯化锑可相互作用,生成蓝色可溶性配合物,其颜色深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比。该物质在620nm波长处有最大吸收峰,其吸光度与维生素A的含量在一定的范围内成正比,故可比色测定。
(2)试剂
①无水硫酸钠不吸附维生素A
②乙酸酐
③无水乙醚不含过氧化物
④无水乙醇不含醛类物质
⑤三氯甲烷不含分解物
⑥ 250g/L三氯化锑一三氯甲烷溶液
⑦ 1:1氢氧化钾溶液
⑧
⑨维生素A标准溶液
⑩酚酞指示剂
(3)操作步骤
①样品处理
②标准曲线的绘制
③样品测定
(4)结果计算
(5)说明及讨论
①维生素A极易被光破坏,实验操作应在微弱光线下进行,或使用棕色玻璃仪器。
②乙醚为溶剂的萃取体系,易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中,不要用力过猛,若发生乳化,可加几滴乙醇破乳。
③所用氯仿中不应含有水分,因三氯化锑遇水会出现沉淀,干扰比色测定。故在每毫升氯仿中应加入乙酸酐1滴,以保证脱水。另外,由于三氯化锑遇水生成白色沉淀,因此用过的仪器要用稀盐酸浸泡后再清洗。
④由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定,通常生成6S后便开始比色,因此要求反应在比色管中进行,产生蓝色后立即读取吸光度。
⑤如果样品中含β-胡萝卜素(如奶粉、禽蛋等食品)干扰测定,可将浓缩蒸干的样品用正己烷溶解,以氧化铝为吸附剂,丙酮、乙烷混合液为洗脱剂进行柱层析。
⑥比色法除用三氯化锑做显色剂外,还可用三氟乙酸、三氯乙酸做显色剂。其中三氟乙酸没有遇水发生沉淀而使溶液混浊的缺点。
维生素C(抗坏血酸)的测定
维生素C是一种己糖醛基酸,有抗坏血病的作用,所以又称作抗坏血酸。新鲜的水果蔬菜,特别是枣、辣椒、苦瓜、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。
测定维生素C常用的方法有靛酚滴定法、苯肼比色法、荧光法和高效液相色谱法等
(1)2,6—二氯靛酚滴定法原理
还原型抗坏血酸可以还原染料2,6—二氯靛酚。该染料在酸性溶液中是粉红色(在中性或碱性溶液中呈蓝色),被还原后颜色消失;还原型抗坏血酸还原染料后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸