文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
人表皮干细胞的定位、分离培养及分化特性的研究
姓名:揭彬
申请学位级别:硕士
专业:护理学
指导教师:伍素华
20030501
英文缩略词表英文全名表皮干细胞含钙镁磷酸盐缓冲液英文缩写中文名称牛血清白蛋白克隆形成率乙二胺四乙酸二钠表皮生长因子胎牛血清胶庋稳芤磷酸盐缓冲液有丝分裂后分化细胞短暂增殖细胞缓冲液第三军医大学硕士学位论文
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人表皮千细胞的定位、分离培养及分化特性的研究摘要形成细胞数大于的克隆,则该克隆为干细胞克隆,予继续传代培养。粜徒涸皮干细胞生物学特性的深入研究具有重要的意义。由于表皮干细胞数量少,而且在体外很容易分化而失去原来的生物学特性,所以干细胞的定位、分离培养及分化特性都年龄的皮肤、正常皮肤与疤痕皮肤中姆植技昂坎钜臁、研究干细胞的分离筛选方法,⒀芯扛上赴逋馀嘌椒ā⑻跫煌丛丛献萄赴拇俑上赴寺方法:〔煌丛吹钠し鬴成人、胎儿、疤痕鄄旄上赴肿颖曛緄整包皮消化获得表皮细胞并传代培养。萄О闹票福河盟苛衙顾谻处理戍纤维细胞,完全抑制其分裂增殖能力。兔芏鹊タ寺∨嘌罕砥は赴缘兔芏冉又钟谧萄层上,培养天后计算克隆形成率。将所含细胞数大于、肉眼直径大于单个克隆挑取出来,分散成单细胞后接种培养,若一个克隆中%以上的细胞能再次快速粘附法筛选表皮干细胞:将在分钟以内粘附于胶原上的表度细胞作为于细胞培养,天后计算克隆形成率。以来加胶原粘附筛选的表皮细胞作为对照。克隆行传代培养。一种方法是每次传代时只挑取其中细胞数大于、肉眼直径大于的单个克隆进行传代培养;另一种方法是将寺〉乃凶哟赴旌舷傻ハ胞,低密度传代培养,天后计算克隆形成率及免疫组化染色筰翱主要结果和结论:,干细胞特异性标志:垦粜圆课辉谡嫫と橥芳馍希⒃诨虺赏欧植干细胞巢辉诿表皮干细胞,具有强大的增殖再生能力,是表皮中各类细胞的起源细胞,在皮肤更新、伤口愈合、肿瘤形成等方面发挥着重要的作用。对表是干细胞研究的重要课题。目的:⒐鄄觳煌丛吹钠し糁斜砥じ上赴的定位分布情况,并比较不同形成及生长的作用;⒀芯扛上赴谔逋馀嘌跫碌纳ぁ⒎只匦浴合素爸漳┓:由的传代培养:将以低密度单克隆筛选法获得的干细胞克隆,以两种不同的方法分别进补鄄代。同时分别以赴⑻ザ靶《上宋赴魑W萄胞,比较其促干细胞克隆形成及生长的作用。第三军医大学硕士学位论文
囊中位于其外跟鞘的膨大部分及球部:而在无毛的皮肤如手掌中则位于网状嵴的顶部;平均染色荧光强度显著高于于成人皮肤。说明胎儿皮肤中干细胞的含量可能较成人丰富;毯燮し舸嬖谧琶飨缘腒分布异常,其基底层呈直线状,部分细胞染色阳砥は赴ぬ匦裕罕砥は赴谔逋獬矢床闵ぃ硐殖鲅杆俜只吧ぜ铀涸焖僬掣椒ㄉ秆「上赴慕峁河攵哉兆橄啾龋涸镃显著升高,培养;而终末分化克隆中所有细胞均已进入终末分化ú勘泶飅,不具有克次降低。但每次传代时若只是将干细胞克隆单独挑取出来分散成单细胞后传代培养,煌萄赴谋冉希河锰ザ蛐《上宋赴魑W萄赴浯俑上赴隆形成及生长的作用与萄赴淖饔孟嗨啤ザし糁校紫赴毡槲猧粜韵赴识嗖闩帕校懈上赴玻性,干细胞呈单层分布,无“干细胞巢”。基底层的荧光强度曲线波动幅度较小,无正常皮肤所具有的典型的“毙吻咛卣鳌4送猓毯燮し羝骄ü馇慷认灾陀谡常皮肤,说明疤痕皮肤中暮靠赡苌儆谡Fし糁蠯的量;扇税毯皮肤中存在干细胞的增殖与分化异常。表皮细胞刚离开基底层即开始表达,与正常成人皮肤相比,疤痕表皮细胞提前进入终末分化。的趋势。砥は赴寺⌒%,另外%以上的细胞不是克隆形成细胞1砻鞔朔ㄊ且恢执稚阜ǎ秆〉腒细胞中有大量甂单克隆细胞传代培养的克隆再形成率:一个干细胞克隆分散成单细胞后接种,其克隆再形成率%,每次传代时只挑取单个大的克隆接种培养,其阅鼙3衷ヒ陨稀6凶哟赴旌舷蟠ù嘌渥艿腃会逐渐下降,、.ァ%、.ァ可见在体外培养条件下寺∠赴鸾シ只漳┓只赴鸾ピ龆啵艿目寺⌒成率逐渐降低,但仍保留相当比例的克隆形成细胞。甂的分化情况:ù嘌笞哟赴锌杉植煌只刺目寺』合生长。其中干细胞克隆保留了干细胞特性,克隆中绝大部分细胞未分化篻阳性梢猿中ù⒔徊皆鲋撤只鏊腥掷嘈偷目寺。欢淘菰鲋晨寺【哂短期的分裂增殖能力,部分细胞发生终末分化,只能分化出终末分化克隆,不能传代隆再形成能力。谔逋馀嘌⒋ù墓讨谢嶂鸾シ只上赴寺∷嫉谋壤逐渐减少,分化克隆的比例逐渐增加,并相应的表现出哟赴淖艿腃渐其阅鼙3衷ヒ陨喜⒛艹中ù,为ァ