实验十酶联免疫吸附试验.pptx

文档介绍：实验九 酶联免疫吸附试验-ELISA实验十 IgG的分离和纯化
实验九 酶联免疫吸附试（ Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）
实验目的
、种类和用途。
（HBsAg）的方法。
。
实验原理
用酶来标记抗原或抗体的免疫分析分析技术。由于酶的高效生物催化作用，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来，这种技术被称为酶联免疫吸附试验法。
实验原理
将已知抗体（或抗原）结合在某种固相载体上，并保持其免疫活性。
测定时将待检标本和酶标抗体（或酶标抗原）按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体（或抗原）发生反应，用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离物成分，然后加入底物显色，进行定性或定量测定。
实验原理
ELISA的基本原理有三条： 
（1）抗原或抗体能以物理性（疏水性）地吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性；
（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；
（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
实验原理
常用酶联免疫吸附试验有
间接法
竞争法
双抗体夹心法
ELISA-间接法
此法是检测抗体最常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体上，加入待测血清(抗体)与之结合，洗涤后，加酶标抗体和底物进行测定。其原理见图。
酶标抗体
固相抗原
待测抗体
E
E
E
ELISA间接法示意图
底物
用于抗原及半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。
以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体上，加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原，使二者竞争地与固相抗体结合，经过洗涤分离，最后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。
固相抗体
E
E
E
酶标抗原待测抗原
E
底物
E
显色反应（弱）
固相抗体
E
E
E
酶标抗原
底物
显色反应（强）
E
E
E
E
E
E
ELISA-竞争法
ELISA-双抗体夹心法
双抗体夹心法常用于检测抗原。
将已知抗体吸附于固相载体，加入待测标本(含相应抗原)与之结合，温育后洗涤，加入酶标抗体及底物溶液进行测定。
酶标抗体
固相抗体
待测抗原
E
E
E
双抗体夹心法检测抗原