文档介绍：华中科技大学
博士学位论文
细胞色素P450表氧化酶基因2J2抑制心肌肥厚的作用及其机制
姓名:李旭光
申请学位级别:博士
专业:急诊医学(心血管)
指导教师:杨光田;汪道文
2011-04
华中科技大学博士学位论文

细胞色素 P450 表氧化酶基因 2J2 抑制心肌肥厚的作用及其机制

华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科/心内科
博士研究生: 李旭光
指导教师: 杨光田教授
汪道文教授

中文摘要
花生四烯酸
,
在生物体内的含量非常丰富,是机体内许多重
要的生物活性物质的前体,间接影响着生物体内许多重要的生物学功能。花生四烯酸
主要结合于细胞膜内侧脂肪酸上,当受外界生理因素刺激时经磷脂酶
水解即释放
到胞浆中。花生四烯酸经环氧化酶和脂氧化酶途径代谢早已被广泛研究和认识。
年代以来,科学家们发现了花生四烯酸的第三条代谢途径,即花生四烯酸细胞色素
,
代谢途径,它在生物体内的生物学及病理生理学意义逐
渐被认识和重视。其中,细胞色素
表氧化酶代谢花生四烯酸生成四种不同的环
氧
二十碳三烯酸
,
,分别为
与
。
表氧化酶主要包括
和
两类,其中在人类仅发现了
,其
在心脏和血管内皮细胞表达最丰富。我们和国外学者已有研究发现
在调节心血
管系统稳态中发挥着重要作用,包括调节血压、对心脏和血管内皮细胞的保护及抗凋
亡作用。
心肌肥厚被认为是心力衰竭的发生与发展中的一个重要中间阶段。心肌肥厚是
心脏对工作负荷增加的一种代偿性反应,尽管最初的肥厚反应对心脏是有益的,然而
持久的心肌肥厚可以导致心力衰竭,而且是主要心血管事件包括缺血性心脏病、心律
失常以及猝死的独立危险因素。大量研究表明细胞色素
表氧化酶
系统在维
护心血管系统稳态中具有重要的作用;增加体内
的含量具有明显心血管系统的保
护作用,同时可能具有抑制心肌肥厚的作用。而细胞色素
表氧化酶基因在心肌肥

华中科技大学博士学位论文

厚以及心力衰竭的作用目前尚无报道。
在本研究中,我们设想通过使心脏
基因表达增加,导致
水平增加,
在预防和逆转心肌肥厚及心力衰竭的作用中具有重要的保护作用。因此,首先在体外
研究外源性
和内源性
对
诱导的心肌细胞肥厚的影响以及可能的分子
机制,然后,在
诱导的心肌肥厚模型中,研究
基因治疗对心肌肥厚的
影响以及可能的分子机制,旨在从整体动物水平和细胞水平明确
系统是
否能够预防和逆转心肌肥厚,进一步明确
系统是否能够延缓心力衰竭的
进展。
一一、、、体外实验体外实验
外源性 EETs 和内源性 EETs 抑制心肌细胞肥肥大大大的作用及其机制的作用及其机制
(一) 实验方法:
细胞培养于含
的
高糖培养基中,当心肌细胞长至
左
右时,将
细胞同步化处理后分别进行了外源性
干预和内源性
干
预,
外源性
干预:将
,
抑制剂
,
以及

一起干预细胞
小时。
内源性
干预:在
干预前,用

将质粒
和
分别转染进心肌细胞,同时在

组加入
选择性抑制剂
,同样干预
小时。
将干预的细胞用
洗后,用多聚甲醛进行固定,加封闭液封闭半小时,按
:

比例加
染料室温染色
小时后,再用洗脱液进行洗脱,加封片液封片,
在荧光显微镜下观察细胞大小,拍照后用软件计算细胞表面积。
将干预后的细胞用
提取
和蛋白质,将
逆转录为
后,用

分析
和
的相对量。用
法测量不同干预组的蛋
白浓度后,比较各组之间的蛋白含量。
经过同步化处理的
细胞,将
,
,
以及
的抑制剂

,
,
以及
与
细胞以及
共
同孵育
小时后,收集细胞上清液。将干预后的细