文档介绍：摘要
为获得大量优质廉价的早期胚胎,满足胚胎工程研究和生产的需要,本试验进
行了屠宰山羊卵巢卵母细胞体外成熟培养与体外受精的研究。
从屠宰场取来的山羊卵巢,采用抽吸法和切割法回收可培养的有腔卵泡卵母细
胞。本试验匕较了在基础培养液中分别添加
对卵母细胞体外成熟培养的影响,四种培养液培养卵母细胞的成熟率分别为
和。培养液的培养效果极显著低于培养液和培
养液的培养效果。培养液中的卵母细胞成熟率极显著高于培养液
,显著高于培养液的卵母细胞成熟率
为了研究培养温度对卵母细胞体外培养的影响,本试验分别在
℃对山羊的卵母细胞进行培养。成熟率分别为。结果
表明℃和℃两种培养温度下的卵母细胞成熟率相比差异极显著
℃的卵母细胞体外培养成熟率与℃的相比差异显著
卵母细胞的体外培养时间对其成熟率及其成熟后的体外受精率有一定的影响。通
过对卵母细胞分别进行的体外成熟培养,成熟率为
和,体外受精后各组的受精率分别为
和。结果表明,卵母细胞培养成熟率极显著高于其他组,受精率极
显著高于培养组。
卵母细胞培养成熟用于体外受精后获得的体外受精率,超数排卵得到的
枚卵母细胞进行体外受精,获得了的受精率,略高于前者。
采集大腔卵泡卵母细胞和小腔卵泡卵母细胞分别进行培养,结果发现,大腔卵
泡卵母细胞的体外成熟率为,体外受精率为,均极显著高于小腔卵泡
卵母细胞
关键词卵母细胞体外成熟体外受精受精卵体外培养
前言
随着配子与胚胎生物技术的应用,人们对胚胎的需求量越来越大。超数排卵和
胚胎移植的合理化应用虽能成倍提高优良母畜的繁殖率,但所获得的胚胎数量有限。
为了解决这个问题,近年来,国内外对哺乳动物卵泡卵母细胞体外成熟、体
外受精及受精卵的体外培养技术进行了大量的研究,取得了很大的
进展。但有关山羊受精卵的体外培养进展却很缓慢。因此,通过卵巢卵母细胞体外
成熟获取大量成熟卵母细胞,而后进行体外受精获得胚胎就越来越引起人们的重视。
牛卵巢卵母细胞体外成熟己有许多研究报道,并能通过体外受精提供商业性的胚胎。
通过体外成熟、体外受精获原核期胚胎进行外源基因转移,已经获得转基因牛,但
山羊卵母细胞的体外成熟和体外受精的研究报道却很少。
卵母细胞体外受精的研究历史
哺乳动物体外受精研究已有一百多年历史,它的发展和成熟不仅为研究动物配子
的成熟、受精机理和早期胚胎发育控制等带来方便,同时也为现代生物工程技术,如细
胞核移植、胚胎早期性别鉴定、转基因等提供丰富的试验材料和基本的技术保证,是
实现动物生产工厂化,解决动物胚胎来源的有效途径之一川。
早在年,德国科学家就开始进行哺乳动物卵子体外受精的
尝试,他将排卵前的卵母细胞和附辜内的精子放入子宫液内进行孵育,观察到第二
极体释放和卵裂现象。此后的几十年里,人们对卵母细胞进行了深入的研究,但世
界上只有少数科学家能够进行体外受精试验。年,张明觉首先把体外受精的兔
受精卵移植给受体母兔获得世界上第一个“试管哺乳动物”。世纪年代以后,
卵母细胞体外培养的研究得到迅速发展,众多科技工作者对哺乳动物卵母细胞的培
养进行了探索,并取得了很好的研究结果。他们不仅仅对培养方法进行了许多
重要的改进,而且使卵母细胞的体外培养的研究对象由试验动物拓展到家畜领域。
年,和首次报道了成功进行精子体外获能的试验。次年,他
们详细发表了这项以金黄地鼠为试验材料的重大研究。此项研究解决了以前精子获
能的繁琐步骤,只需在简单培养液中作获能处理即可,该技术大大加快了体外受精
的开展,从此体外受精技术开始逐步完善和发展,己相继在余种哺乳动物上获得成
功等把牛卵巢卵母细胞经体外培养成熟后用于体外受精,获得
了细胞期胚胎,手术移植后获得世界上第一例“试管牛犊等也把
牛卵巢卵母细胞经体外培养、体外受精处理后进行了移植,获得了产犊的结果。国
内外对哺乳动物卵母细胞体外培养及体外受精技术的研究进展很快,我国学者从
年代末,开始家畜卵母细胞体外成熟培养和体外受精的研究工作并取得很大进展
年,徐照学等利用屠宰后的黄牛卵巢,建立了一套有效的卵泡卵母细
胞体外培养成熟一体外受精一受精卵体外发育程序,使受精卵的卵裂率以及桑堪胚和囊
胚的发育率分别提高到。旭日干等将绵羊卵泡卵母细胞体
外受精,移植后获得羔羊
但是,关于山羊体外受精技术的研究进展还不是很大。卵巢卵母细胞的体外培
养研究最早见于,他曾探索了卵母细胞的成熟条件及影响卵母细胞成熟的抑
制因素”。自从年用超排山羊卵母细胞与精子体外受精获得第一只试
管山羊,直到年,等才得到用山羊体外成熟的卵母细胞与体外获能
精子受精的试管后代年,钱菊汾等利用山羊输卵管