文档介绍：甘蔗农杆菌介导基因遗传转化的研究广西师范大学硕士学位论文院系:生命科学院年级:级专业;野生动植物保护与利用研究方向:野生植物保护学导师:秦新民教授研究生:于兰完成时间:年广西自然科学基金项目资助
甘蔗农杆菌介导基因遗传转化的研究摘要在现今多种植物基因遗传转化方法中,农杆菌质粒和质粒介导的遗传转化方法是应用最早和最广泛的方法。甘蔗属单子叶植物,是禾本科中重要的糖料作物。甘蔗的生长期长,鳞翅目、同翅目等昆虫危害严重,采用基因工程的方法,培育甘蔗抗虫品种是防治甘蔗虫害的根本方法。本研究利用根癌农杆菌介导、农杆菌介导与负压相结合处理愈伤组织的方法,对甘蔗进行了基因的转化。在对影响根癌农杆菌转化效率的多种因素进行比较研究后,发现选择受体组织合适的生理状态、受体组织在转化前吹干、合适的侵染时间、共培养天数、抗生素的浓度、负压处理和添加乙酰丁香酮均直接影响根癌农杆菌转化的效率。选取胚性良好的型愈伤组织,在转化前吹干~臼奔湮,共培养欤锋呙顾嘏ǘ鹊陀/貉怪滴R.,浓度为疞时可以提高转化效率,并据此建立了根癌农杆菌介导甘蔗的转化和再生系统。将心叶接种于../疞蔗糖,琼脂%,培养基中℃暗培养蠹檀淮危盏疾鶬团咝杂俗橹媚髯咏浼兴槌大小的小块,置入添加蜭的根癌农杆菌褐校秩臼奔湮,共培养旌螅H隡/疞蔗糖/嘌谢指天,再转入..疞/崽疞中,遮光培养后,置入其/崽疞分化,卡那霉素抗性愈伤组织获得率在侵染贝锏阶畲笾灯骄ィ和币愿收嵝囊队俗橹牧希通过循环水式真空泵,产生负压,设定不同的负压值,在农杆菌菌液中感染后,在负压条件下继续侵染螅秆〕隹剐杂俗橹⒒竦米;仓辏渲性诟貉刮一弊;蚀锏阶畲笾担淇敲顾乜剐杂俗橹竦寐势骄%。将抗性愈伤组织转入..,将抗性苗移入大田种植,鲈潞取幼叶,提取总鯬杂交检测。本实验共获得昕敲顾乜剐灾仓辏×法提取总哟炕螅通过做觳猓峁砻鳎曛仓瓿恃粜浴?钩媸笛榻峁砻鳎;蚋收嶂仓对鳞翅目钻心虫有一定的抗性。初步证明基因已成功整合到了转基因植物的植株中。关键词:甘蔗;抗虫;农杆菌:负压:遗传转化:转基因检测;抗性鉴定研究生:于兰导师:秦新民教授专业:野生动植物保护与利用向:
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序言前言⒏收峥钩嬗甘蔗是一种全球性的经济作物,是我国最主要的制糖工业原料。在甘蔗的生产中,会受到多种病虫的危害,病虫害严重影响甘蔗的产量和品质。蔗糖业是广西的一大支柱产业,年代中期以来,广西的蔗糖生产取得了很大成绩,随着甘蔗种植面积的扩大,农业耕作制度的变革,引种的频繁,化学药物的滥用,再加上气候、环境复杂多变,甘蔗病虫害发生日趋严重。因此,甘蔗病虫害的防治是甘蔗生产上的重要研究内容。据统计,在甘蔗的一生中的有害及有益的生物共郑渲泻Τ婀种‘”。严重影响甘蔗生长并经常造成灾害的有:甘蔗螟虫、甘蔗棉蚜、甘蔗白蚁、甘蔗会龟子、蔗头象虫、束腰蝽蟓、甘蔗粉介壳虫、甘蔗截马和甘蔗刺根蚜等。%,螟害节%。甘蔗减产ィ档驼崽欠軴,.。甘蔗虫害传统的综合防治包括:农业防治,化学防治,生物防治,人工、机械防治和植物检疫等综合措施。但是这些方法只能在一定程度上减轻虫害,但是不能从根本上防治虫害。目前防治甘蔗虫害的方法主要是化学防治,虽然化学防治对控制鳞翅目、同翅目等害虫起重要作用,但是随着时间的推移,农药残留,环境污染及害虫的抗药性等问题益突出,这大大限制了化学防治的应用。防治甘蔗病虫害的根本在于培育抗病虫甘蔗良种。传统的抗病虫育种方法由于周期长转移的基因不确定,难以突破种与种之间的屏障,而且长期的高度近亲繁殖使得一些广泛栽种的作物遗传背景越来越窄,无法满足防治甘蔗病虫害的需要。八十年代中期基因工程的兴起为害虫的生物防治带来了一线曙光。在现今多种植物基因的遗传转转化方法中,农杆菌介导的遗传转化法是应用最早和最广泛的方法。其优点在于:第一由于利用的是天然转化载体系统,因而成功率高、效果好;第二转移的基因常为单拷贝整合,很少会发生甲基化和基因沉默。因此遗传稳定,并多符合孟德尔遗传规律,转基因植株能较好的做育种的中问材料;第三费用低,方法简单易操作。由于单子叶植物不是农杆菌的天然宿主,曾认为农杆菌介导法不适于禾谷类等单子叶植物遗传转化。随着农杆菌浸染机理的深入研究和揭示,农杆菌介导的单子叶植物遗传转化取得了较大进展。、珽甇踝哉碌、⒘艘桓鲇行的甘蔗农杆菌介导转化方法”盝。
甘蔗抗虫基因工程虫害是造成农业减产的主要原因。传统防治害虫的策略是化学防治,化学农药和生物农药的应用虽然可以在一定程度上减少产量