文档介绍：重庆医科大学
博士学位论文
hIGF-1基因修饰骨髓间充质干细胞移植修复兔关节软骨缺损的
研究
姓名:丁幸坡
申请学位级别:博士
专业:儿科学(小儿外科)
指导教师:金先庆
20060501
指导教师签名:么篁燧期:三鲥丘』兰立奎盘。日期豆至型蔓重庆医科大学研究生学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书论文作者签名:本人申明所里交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。学位论文作者签名日幺本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。孓,日
符号说明英文缩写——猯
骨髓骨髓间充质干细胞——多克隆位点光密度值聚酰胺胺型树状高聚物聚合酶链式反应磷酸缓冲液聚乳酸/羟基乙酸共聚物聚羟基乙酸聚乳酸每分钟转速逆转录聚合酶链反应扫描电镜甲苯胺蓝组织工程透射电镜转化生长因子瓺重庆医科大学博士研究生学位论文
核细胞的表达摘要第一部分:携带一蛑刈樵靥宓墓菇ḿ霸谡胰岛素样生长因子一是在软骨发育和软骨自稳态调节中最重要的生长因子之一,能刺激软骨细胞分裂增殖,并促进软骨细胞合成型胶原和蛋白聚糖,维持软骨细胞的表型等。随着基因转移技术的发展,将外源基因导入特定靶细胞中使之高效稳定表达,进而发挥作用已完全成为可能。本实验通过构建含截短型一蚝驮銮啃绿色荧光蛋白标记基因的重组真核载体并检测其在真核细胞细胞的蛋白表达,为软骨组织工程种子细胞的基因修饰奠定实验基础。目的构建增强型绿色荧光蛋白基因标记的—婧吮泶镌体,为软骨组织工程的种子细胞的基因修饰提供方便、实用的载体工具。,≈,构建成真核表达质粒一——璓及双酶切鉴定正确后转染细胞,通过荧光观察直观检测一谋泶铩结果成功构建了增强型绿色荧光蛋白基因标记的真核表达质粒重庆医科大学博士研究生学位论文
第二部分:.蛟贛谋泶一⒓觳獾侥康幕騢在细胞的强表达。结论所构建的..—靥逋ü私峁购凸δ艿募测验证,有望在基因改良软骨组织工程种子细胞的过程中发挥其应有的作用。关键词人胰岛素样生长因子一虮泶铮婧嗽靥软骨组织工程的首要问题是种子细胞。骨髓间充质干细胞琈来源广泛,取材容易,分化潜能好,多次传代后仍能保持良好的生物活性,是软骨组织工程的良好的种子细胞,但被作为基因治疗的靶细胞则尚未引起足够重视。。不仅能够在体内外维持正常软骨细胞的代谢,还能一定程度上促进受损软骨的修复,更重要的是,它能促进向软骨细胞方向分化、增殖。但使用外源性的方法存在很多局限,如半衰期短需要反复给药、价格昂贵、外源性蛋白的免疫毒性等。,
从而在体内外发挥其对向软骨细胞分化的促进作用。目的:以一蛐奘伟邢赴鸐觳鈎和软骨分化标志性蛋白型前胶原在的表达情况,以得到可用于软骨组织工程的基因修饰的种子细胞。方法:用密度梯度离心法分离、培养兔;ü光观察、流式细胞检测、、⒚庖呦赴У确椒ḿ觳一虸颓敖涸贛谋泶锴榭觥结果:①成功从兔骨髓分离出了具有良好生长状态和分化潜能的,筛选证明合适的培养瓶二维接种密度约为~×痬在靶细胞的表达:转染后可在荧光显微镜下观察到明亮的绿色荧光和相应的细胞形态,荧光表达最长可以持续左右;┰龀龃笮≡嘉的目的条带;峁允玖俗H綧蟛