文档介绍：安徽农业大学硕士学位论文烟草体内维生素B6代谢的研究姓名:曾海彬申请学位级别:硕士专业:食品科学指导教师:黄龙全 2011-06 i 摘要维生素 B 6(VB 6)是一类化合物的总称。近年来研究发现 VB 6在植物体内发挥抗逆作用。烟草作为模式植物其体内 VB 6的存在形态还未见报道。本研究采用高效液相色谱荧光检测技术对烟草体内 VB 6的存在形态进行了分析。结果表示: 土壤栽培烟草叶、茎和根中 VB 6的含量依次为、、?μg/g鲜重;组培烟草叶片的VB ?μg/g? 鲜重,构成比为磷酸吡哆***(PMP)7% 、吡哆***(PM)14% 、磷酸吡哆醛(PLP)19%、吡哆醛(PL)29% 、吡哆醇(PN) 30%;组培烟草在连续 3?周的检测过程中, PLP?和PL含量下降、 PN? 含量上升, VB 6总量保持相对稳定。研究结果有助于以烟草为材料,进一步开展植物体内 VB 6代谢机制和特殊生理机制的研究。本文通过构建组织培养模型, 在组织水平上探讨植物体内的代谢机制。采取在MS?培养基上外源添加 VB 6(PM ,PL,PN) 干涉植物的生理环境,采用应答分析的方式,系统分析 VB 6的存在形态。取烟草叶片组织加液氮研磨加提取液得到粗酶液,测定相关代谢酶的酶活,分析 VB 6相关代谢酶酶活变化为应答分析提供依据。外源添加 PM 后叶片中PM 增加到54倍, , PN增加到11倍; 外源添加PL后叶片组织中 PL增加到12倍, PN增加到 28倍,PM 增加到 9倍; 外源添加 PN后叶片中PN增加到40倍, PM 增加到 4倍。以上三种不同处理并未引起 PMP、PLP 量得变化。三种处理 VB 6总量都显著变化。为了分析植物吸收 VB 6的方式, 通过在MS培养基中设置不同的梯度, 分析添加量和吸收量的关系,发现烟草吸收 VB 6的方式为自由扩散。本实验摸索出烟草 VB 6体外代谢相关代谢酶的最适反应条件, 发现 PL激酶最适 pH? ?反应时间 3?h,PNP/ PMP 氧化酶最适 pH? 2?h,PLP-磷酸酶最适 pH? ?反应时间 10?min,PL还原酶最适 pH? ?反应时间 2?h,PM- 丙 ***酸转氨酶最适 pH? 11,反应时间 2?h。反应温度都为 37?℃。 ?± ol/min/g鲜重, PNP/ PMP 氧化酶 ?±?nmol/min/g鲜重, PLP-磷酸酶179. 71?±, PL还原酶 ?±?nmol/min/g鲜重, PM-? ***酸转氨酶 ?±?nmol/min/g鲜重。 VB 6进入植物体内, 引起体内 VB 6量的迅速增加外,同时也引起了相关酶活性的变化,三种处理都会引起 PLP-磷酸酶活性的增加; PL激酶活性的降低, PNP/ PMP? 氧化酶的增加, PL还原酶活性的增加仅见于 PL添加组。 PM-***酸转氨酶都有所增加。关键词:烟草,组培,酶,液相色谱,维生素 B 6 ii Abstract Vitamin?B 6(VB 6)isthe?gene raltermfora?kind? 6 existsin?severa lforms,and?hasbeenlinked?t ostressresponsesin??no? repor tsaboutthe?distributionofB oplantshave?beenobserved.? In? ourexperi ment,the?determ inationofVB oplantswas described?by? using?highperformanc e?liquid?chromatography ?results indicated?that,the?contentsofVB 6inleaves ,tender? stemand?rootswere ,? ?μg/ g?freshweight,respec ?basal? media?exhi bited?a?highcontent??μg/g ?constituen tratioofB 6 vitamerswere?asfollows:?pyridoxamine?5′-phosp