文档介绍：东北农业大学
硕士学位论文
Bt抗虫基因导入马铃薯的遗传转化研究
姓名:苏俊峰
申请学位级别:硕士
专业:作物遗传育种
指导教师:田兴亚;卢翠华
20040601
摘要本研究通过基因工程手段,利用农杆菌介导法将基因导入马铃薯品种大西洋,同时对马铃薯品种大西洋、地西瑞、东农涂诵号的茎段和叶片再生体系进行优化,建立了马铃薯高效再生体系和遗传转化体系,探讨了影响植株再生频率和遗传转化效率的因素,确立了晟佳植株再生体系和遗传转化条件,获得了转基因植株。主要研究结果砹迨碓偕逑档慕ザ巫罴延伺嘌#篗蝳籇;最佳分化培养基为:/。叶片最佳愈伤培养基为:.;最佳分化培养基为:/蛐筒煌谙嗤秩咎跫碌挠擞盏悸什钜旖洗蟆4笪餮蟮挠寺首罡茎段为.%,叶片达.%。韵嗤呐└司杲榈疾煌嘈屯庵蔡澹庵蔡宸只什煌1臼匝椴捎镁ザ和叶片作为遗传转化的外植体材料,最佳外植体为叶片。糯;跋煲蛩靥教ザ瓮庵蔡遄罴言づ嘌奔湮耸笨剐杂寺首罡撸ァj杉压才养时间为,抗性愈伤率最高为.%。叶片外植体最佳预培养时间为,此时抗性愈伤率最高,为.%。最佳共培养时间为,,为.%,菌液浓度时,抗性愈伤率最高为.%;.%。本裂∮媒谕锋哙珉磕啤Eǘ任/保赏耆种凭纳ぃ叶外植体再生无影响。剐匝≡窦廖?敲顾。在不同生长阶段,选择压力不同。≡裱沽ξ:≡裱沽ξ。剐灾仓甑募觳如下:痩疘。%。
试验接种转化鲆镀竦玫拇笪餮笤偕仓昃璓检测和猄咏检测有瓿恃粜裕;饰.%,初步证明了目的基因以整合到了马铃薯基因组中。关键词:马铃薯;再生:遗传转化;基因东北农业大学农学硕士学位论文Ⅵ
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把研究的日的和意义靛强,骞季孛露期短,生产成本镊,不游蒜弼境等饶点,为壤魏育耱舞辟了一条耨熬途径。马铃疆原产予囊美潮安第斯出,世纪传到欧洲,世鳃由荷兰人带到台湾。由于它产量离,适应性强,营养丰富,抵御自然灾害能力强,使的种植面辍迅速扩大,成为世界上阴大农作物之一,同时也是厦耍的粮菜饲兼用作物。基蘩挺赛上耱援马铃薯戆国家蠢觯芟按铩万鄄恳纯中国的种植面积占%.%,总产量约占世界的%。特别是昀此孀湃嗣裆钏的提高和农业产业结构调整的需要,马铃薯的种植面积得到迅遮的发展,!]筒S昝./融邹涞痟!码铃薯块麓淀粉含搬高,蛋囱质可利用率高,寓含人体自身不能制造的种氨基酸,含多秘维生索,矿瑷惩素。马铃薯不仅可戳鲜食,嚣且可以加工成薯条、簧片鞠全粉,也怒淀粉、葡萄耱、酒精等工业产品生产原料。在马铃薯的生产过程中,虫害是造成马铃蒋减产的麓要原因之一。据不完全统计,全熬赛表俸糖每年嚣瘸盎害造簸懿损失约占其憝产量豹谄湄ナ怯墒⒑Γ粄越兹。而马铃薯感虫害危鬻较严重的作物之一,马铃落从播种到收获的整个过程中,有许多害胀对它进行危害,不仅影响丁生长,蕻至会造成死亡。丽且在害虫咬伤组织的同时,还带来了瘸糍,或为瘸害的侵絷带来方便,困诧虫害静静治在马铃薯生产串占有重簧的遗俄。马铃馨的主要的虫害包括:蚜虫、马铃薯瓢虫、马铃薯块茎蛾、地老虎、蛴蝤、蝼蛙窥金针搬等。常规的农作物品种培育和虫害防治技术在抵御虫害方面曾缝发挥了邕太的作街,但由于大量使用化学药剂,造成对生态平衡的破坏。对人、畜健康严重的危害,农药残蜜霹太粪生存繇境逢藏长期影晌,傻害斑产生了撬蘩睦。培育抗虫熬释是~狰最荛经济有效的途径,但由于可供利用的抗源匮乏。常规育种受到了很大的限制。随着分子生物学的迅速发髓,科学家利用基因工程技术,将外源基因导入农作物,提高农作物的撼虫能力,解决了常撬拄术无法解决的问题。由于基因工程技术可以亨『,突破了远源杂交不亲和的阻碍。丰富了抗源基因。且有可控目前檬物遗传转化方法较多,可分为三类:一是以裁体为媒介的遗传转化,包括农杆蘸质粒或威粒介导法和植物瘸毒载体介导法;二是外源闹苯幼;0黎乙二酵浃,耩震体法,基因枪法,魄激法,超声波法等:三蔗摊质系统奔导的遗传转化,包括予房注射法,花粉镑通道法,生殖细胞浸泡法。由于农杆菌介导利用天然的转他载俸系统,其富转诧率裹,效果好,攀拷贝数多,稳定性好,戏本低的特点。嚣褥成为当今植物遗传转化的常用的方法。据统计在众多的转基因植物中,%是由农秆蔼介导转化的。本试骏裁嗣表拇蓥奔导注释蒸困导搅迨恚苛擞暗章砹缡碜F拘时V饕
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