文档介绍：山东省医学科学院
硕士学位论文
肿瘤抑制基因Rhobtb2的表达分析及其真核表达载体构建
姓名:阴海鹏
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:毛海婷
20070501
主要符号表山东省医学科学院硕上学位论文
论文作者签名:翌匠丝塑§生逸玺堂学位论文独创性声明学位论文知识产权权属声明本人声明,所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中引用他人的成果,均己做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属山东省医学科学院。山东省医学科学院享有以任何方式发表、复制、公开阅览、,署名单位仍然为山东省医学科学院。成果。导师签名:
肿瘤抑制基因谋泶锓治黾捌湔婧吮泶镌靥骞菇中文摘要吹鞍紫喙氐陌礁鯞结构域的基因蚾的成员之一。蚨ㄎ挥谌死嗳旧蜃槿ǔぴ研究生随着人类基因组计划的完成,我为主的功能研究、疾病相关性研究等前沿领域。自年起,我国将“功能基因组与生物芯片”列入个国家重大科技专项,其中的第一个专题为“人类重大疾病相关基因的研究”,其中“人类重要生理活性及具有药物开发前景的功能基因的研究”的主要内容包括:建立规模化的人类重要生理功能基因克隆化鉴定:重组蛋白表达;细胞水平与动物整体水平的筛选;系统性的基因功能研究并最终进入基因组药物和药物靶标的开发阶段冢琑粲赗家族的小分子鸟苷酸三磷酸酶護。是进化保守的亚家族,共有鐾庀宰樱甊蛋白在多种组织中均微量表达,其中神经组织的表达水平最高,它参与细胞周期的调控及细胞骨架蛋白的形成,与转录调控、信号转导等多种生命活动有关昀矗庥行┭芯糠现该基因在多种肿瘤组织如乳腺癌、膀胱癌、肺癌中表达降低或缺失,从而引起研究人员的关注。目前有关该基因的功能研究在国内尚未开展。我们的课题研究将围绕着与乳腺癌、肺癌相关的肿瘤抑制基因箍!本研究首先采用技术检测了蛟谡E咛プ橹岸嘀种瘤细胞中的表达水平,初步探明蛟谥琢鱿赴械谋泶镒纯觯⒃擞入表达缺失的乳腺癌细胞,为进一步研究其生物学功能及探讨将其用于基因治疗研究目的:检测蛟谡E咛プ橹岸嘀植煌琢鱿赴曛械谋泶锴榭觯⒉握专业免疫学阴海鹏导师毛海婷研究员包含编码序列刈榧际豕菇薘基因的真核表达载体,将野生型蜃的可能性奠定基础。山东省医学科学院硕士学位论文
蠷的蛄械魅∧康幕颍⒐菇ㄕ婧吮泶镌靥濉实验方法:赴嘌白橹4妫合赴暧谂嘌褐校糜妗%姆跸涑9培养。新鲜胎脑组织取小块,置于液氮罐中速冻,保存备用。检测蛟谡E咛プ橹岸嘀植煌琢鱿赴曛械谋泶锼健螅琍扩增虻腃区域,并通过上下游引甊克隆载体的构建并测序:采用基因重组技术构建ń心康幕虻牟庑颍与螻腄蛄斜榷浴目的基因的突变修复:根据测序结果,采用引物修复、重组兔盖蟹从进行耐槐湫薷矗捎没蛑刈榧际踅康幕蚩寺〉皆靥迳辖胁序,直至目的基因的测序结果与参考序列一致。甊表达载体的构建:采用基因工程技术构建甆甊重组玆重组表达载体导入赴涸擞醚衾胱又侍遄H镜姆椒ǎ将重组表达载体转染入靶细胞,利用荧光显微镜、流式细胞仪技术检测不同条件的转染效率,从而对转染条件进行优化。榷ㄗH镜南赴档纳秆。翰捎最低致死量法加压筛选稳定转染的细·胞系,通过ú舛ā疓淖畹椭滤懒俊甊基因在乳腺导管癌细胞株斜泶锶笔В谌橄傧侔┫赴一奥殉舶⒐卑螂装┖臀赴┫赴芯斜泶铩J笛筛选出了泶锶笔У娜橄侔┫赴礣,这为下一步因的功能研究提供了良好的前期研究基础和理想的模板。伺叻蜗赴械魅×薘的颍⑼ü,经懊甊基因表达水平检测:提取组织或细胞的擞肦甈法甊目的基因的调取:。.刈樵靥澹捎肞表达载体。选用实验结果:游分别添加了虰礁雒盖形坏恪与刈楹螅璓及酶切鉴定,构建了ü蛲槐涞男薷矗寺〔庑蚪峁隚即山东省医学科学院硕士学位论文·
刈楸泶镌靥灏凑沼呕淖H咎跫既隩细胞,经压力筛选获本实验检测了蛟谡E咛プ橹赴岸嘀植煌琢鱿赴曛的表达水平,并调取了腃区域,成功构建了甆甊重组真核表达载体,建立了稳定转染虻南赴P停8没虻墓δ及疾病关联性研究奠定了基础。关键词:喝橄僦琢觯嚎寺”泶铮徽婧吮泶镌靥澹籘细胞;基因;切鉴定,构建了重组表达载体,命名为甆甊。得稳定转染的细胞系。结论:山东省医学科学院硕宦畚
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