文档介绍：复旦大学
博士学位论文
人肝癌转移抑制基因染色体功能定位与TEY1基因的研究
姓名:刘虎
申请学位级别:博士
专业:肿瘤学
指导教师:叶胜龙
20030501
定位与基因的研究人肝癌转移抑制基因的染色体功能生塞熊曼宜那捌诠ぷ鞣⑾号染色体短臂上的缺失与肝癌的转移相关,提示人染色体上存在肝癌转移抑制基因的可能性,但缺乏其条件在/裸鼠中建立大体肺转移动物模型。〕鲂碌那傲邢侔┳R埔种苹肝癌细胞株和蜗赴┦质醣瓯局衝Ⅳ虻谋泶锼浇辛硕糠笫蟾伟┫赴礐皮下接种芰湫坌院周龄雌性/裸鼠,观察皮下成瘤及肺部和腹腔脏器的大体转移灶形成情况,取可人湃旧迳洗嬖诟伟┳R埔种苹虻墓δ苤ぞ荩ü⑾赴榈嫉娜旧转移方法将随机标记有耐药基因恼H号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞系校肎虷进行药物筛选微细胞杂交克隆,单细胞分离克隆方法进行单细胞克隆,甈和瓼椒ǘ缘既氲号染色体进行证实。将获得的微细胞杂交克隆和赴直鸾又致闶笃は拢观察皮下成瘤性、大体和显微肺转移灶形成情况的差异,结果进行单因素方差物进行荧光定量S每醇一騁的起始浓度作为参照标化的起始浓度,标化结果进行单因素方差分析。结果下成瘤率/菩月闶笾蟹伪砻嫒庋劭杉飨宰R圃睿R坡饰伪砻娲筇遄R圃钪形皇觯闶螅迪伦R圃钪形皇个,裸鼠,腹腔、肝脏、脾脏、肾脏和心脏均未见转移灶。雄性裸鼠未见大体和镜下胞分离克隆方法获得个具有双重抗性的微细胞杂交克隆,甈发现导入文摘要【摘要】背景与目的存在的功能证据。Q扒蟾伟┳R埔种苹虻墓δ苤ぞ荩匦虢⒁熘动物自发转移动物模型。大鼠肝癌细胞系赴翟贙裸鼠自发转移实验中只形成显微镜下的小转移灶,但未形成肉眼可见的肺转移灶,尚需改进实验蚴亲罱因,为研究基因作为肝癌转移抑制基因的可能性,我们对不同转移潜能析。方法能转移的器官做组织学检查,肺组织连续切片并计数镜下转移灶。Q扒统计分析。崛「伟┫赴闙瓾,.琀⒄细胞系透蜗赴┦质醣瓯镜腞,反转录合成第一链,反转录产闶笃转移灶。竦镁哂蠫虷双重抗性的微细胞杂交细胞,通过单细到械娜号染色体发生了染色体片段丢失,瓼⑾值既氲娜号中国复旦大学中山医院复旦大学肝癌研究所博士学位论文琢鲅ёㄒ怠
染色体与大鼠染色体发生了稳定的重组。微细胞杂交克隆的自发转移实验发现起始浓度分别为.±×,.±×—∞.T诹嚼忻怕霭┧ǖ牟±校┡宰橹蠺谋泶锼较灾哂病例中,播散灶中表达水平和癌旁组织中的差别无显著性。结论细胞系在雌性/裸鼠中能充分表达自发性转移潜能,肺脏是其优势转移器官。成功建立的大鼠肝癌自发肺转移裸鼠模型为肝癌转移抑制基因的染色体功能定位研究提供了适宜的动物模型。号染色体对太鼠肝步定位奠定了基础。谔逋馀嘌南赴校琓虮泶锼接敫伟┫胞的转移潜能负相关。门脉癌栓病例手术标本中的检测结果提示基因的表达水平与肝癌的转移潜能负相关。播散灶病例中,未发现此种负相关性,但这些播散灶是否为多中心发生的癌灶尚需进一步鉴别。基于此发现,可【关键词】癌,肝细胞;肿瘤转移;人湃旧澹晃⑾赴榈嫉娜旧遄有鲈咏豢寺〕,,和昊蟮。..叮橇秸呶尴灾耐臣蒲Р钜癌组织以及门静脉癌栓中的表达水平。,,提供了人湃旧上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据,并为其在人湃旧迳系慕以推测蜃魑8伟┳R埔种苹虻目赡苄浴移;转移抑制基因:序列标签位点;聚合酶链反应;荧光原位杂交:疾病模型,动物;荧光定量籘发生完全抑制。×,
:..协璼頢/~&,.甋,瑆../.珻甋,—复旦大学中山医院复旦大学肝癌研究所博士学位论文琢鲅ёㄒ怠
甌甌埘狥.。.±×。瑀甌..%./..×.,一,.,‘·..,.,.踮..,..,,琭痩,.—甋—.复旦大学中山医院复旦大学肝癌研究所博士学位论文琢鲅ёㄒ怠
琀籆,琍—籘..畁;.,,:/,.,,籊,;;籔籇,;复旦大学中山医院复旦大学肝癌研究所博士学位论文咨醚ёㄒ怠.
前言原发性肝癌的恶性程度很高,索有“癌中之王”之称,其最主要的恶性表型之一就是转移。肝癌的转移严重地影响了患者的生命和预后,而目前对肝癌转移的分子机理尚未阐明,也未发现任何编码肝癌转移抑制功能的基因。如果能够证实人类染色体上确实存在肝癌转移抑制基因,缩小其在染色体上的范围,并进一步定位克隆,无论是对肝癌转移分子机理的阐明还是对肝癌转移的肿瘤转移的发生常与肿瘤转移抑制基因的失活有关,肝癌转移的发生过程中也可能存在肝癌转移抑制基因的失活,然而,迄今