文档介绍：浙江大学
博士学位论文
利用生防木霉基因提高水稻抗病性研究
姓名:刘梅
申请学位级别:博士
专业:植物病理学
指导教师:徐同;孙宗修
摘要转基因水稻代表现堡直了对纹枯病的抗性。猿谄鲆磺虻淖7币蛩竞蟠蠵撩定和潮霉素抗性黢定,结果表明大约%的代转撼因株系符合簟ざ福阂跣的分离比,寝明确幽一幻水稻纹糖痍盏臼萑是Q重危害我国水稻生产的冀麓病害。由于纹樯病挠源缺乏饺该疲静抗瘸育种工作进静有效鳓途径。在本实验室的翦期作中,将来源予生防嶷藏哈茨本霉哺谆胐蚲转化水稻,以期通过在水稻中高水平表达几丁质酶和葡聚糖酶活性,获得高抗纹枯病和稻瘢病的转基因水稻株系,为水稻的抗瘸遗传育种提供这麓拣系含毒钫隙械恪M割彀痉窒耹代潦霉素菝瞧蓬拣遴譬亍杂交撩定,结果证实外源蒸因已经稳定速传给代。对部分代株系进行潮霉索抗性鉴定和嵌ǎ峁砻髌鯡狄丫榷ㄒ糯ǜ鳷仓辍觳饬薚猅仓甓运疚瓶莶瘸予汉虰群如稻瘢瘸”绲目剐裕ザ跋当龛了对这两种瘸害抗瞧水平不同程度熬援离。有鲋晗缔丝刮河攵哉障囿黥代缝合植株进行稻瘟病抗性鉴定,转基因檄株仍然表现对所检测的龅疚展缓慢,而稻瘟菌小种的复杂多样,常使育成的抗病品种在短期内失去抗性。利用外源几丁质酶基因和葡聚糖酶基因提高水稻对这两种病害的抗性被认为是一媚伊璺捕∧臆舱粝午种檀繲导入水稻,该基因受舳拥骺兀谒局凶槌尚捅泶铮醪郊本研究对上述基因在水稻中的遗传稳定性进行了检测,并对转熬因水稻后代进行撬纹糖痍巍稻瘟病薅逸。为进一步提裹承穰对绞辏痍稆疆癌痰戆狡性,采曩Ф樱⑸月羊中本霉麓壁降解酶蕊因、基础专孝辩。主燹结粟热下;在这魑株系中有单个攒入位点;大约%的代株系分离比符合:砻土礁龇直很擞箸的提高,其中表现对两个稻瘟病小种完全免疫。澍的麓动予取代珏
晌,霹见阕一。诛艘桓龌岔氨泶锘崾芑螋溆捌臁具街双元载体本身携带的棚甲基因与粢颍佣Q芯坎汇誘—蕴小种完全免疫,但是浚株系对纹桔病的抗性无明显提高。这盛缩果表明内性方丽起了重要作用。但并末获得对秩吃季哂懈叨瓤剐缘闹仓辍Q徊教岣弑镜颈缥铺侨澈偷疚寥撑文油埽美垂鲇枭洞哪久甑个麓壁降解酶基霾与构麓了包括不同基因及其所有组合的鲩瘴锉泶镌靥澹扛鲎嵋蚴芏懒⒌转耩阂植株中表达的影响提供了一套比较完熬的材料。椿滋行了觳夂蚐咏患觳猓サ奶粗晷斜嬖椿中的懋少一个基因,%以上的植株整合有完整的外源基因片断,而且多数基阑在受体植株中有单个整合位点。对不同裁体的分化率和绿茵率进行分析,发魄隧藿瓺区长度的增大,分化率和绿茁率都有降低的趋势。携带纂霞懿载矮导数分亿率、绿萤率戳及分化速度夔显著蹲甄。F煲蛟偕仓暌圃缘酵寥乐幸院螅煌靥宓淖;仓瓿苫盥屎驼V仓比例明显不同。转化单个基因的植株成活率和正常植株比例最低,在所有携带基因的载体的转化植株中都有部分植株出现不同程度的矮化瑷象,这穆檀榇款时冀巍寒接秘任谤病豢憝。凌援下窭褒揭色斑点,不§￡撞穗、结实,所检测豹矮化德株中都具有较离水平的,,可见严重影响了水稻的生长。转化虻乃境鱿稚ぱ踊合窒螅遣⒉挥跋熘旮吆徒崾怠转化藏体上其它外源綦闲的存在会女鮣騟对植株生长造成的影陨鲜鲎;仓闠СふV仓杲形崎撇】剐约ǎ;ジ銎暇厶酶蒸因植株因为正常植株比例太少不做分析外,其余肿;曛卸即嬖切几丁质酶基因。已经在受体植物中准确表达,并且在提高水稻抗病启动子调控。构建的鲈靥宀唤霭凶楹系个外源基因,而且度、不蘑基霾缝合与不嬲基因接确方淘对穗躲遗抟转纯效率以及钤潺基霆在帽臼笛槭业呐└司胄ё;逑担种胞壁降解酶基因与所有组合的鲈靥宸直鹱H刖诀鲋质靼酌..中,共获褥霉生壹橡嘀辍6圆糠衷偕
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