文档介绍：中文摘要
本文研究了青菜的再生体系和农杆菌介导转化几种重要因子的影响,并首次探
讨了辐射处理对青菜再生和遗传转化的影响。
为建立青菜的高频再生体系,对影响青菜再生的因素进行了分析。在青菜的离
体培养过程中,外源激素对再生有着至关重要的作用。在所用的种激素组合中,
培养基中附加叭和叭可以使再生频率达到最高。在培养基
中添加对子叶离体再生具有明显的促进作用,的可以显
著提高再生频率。不同苗龄的外植体其再生频率存在很大的差异,而且随基因型的
不同而变化。最适苗龄一般在无菌苗培养天,矮抗青为天,上海青为天,
苏州青为天。对子叶、子叶柄、带柄的子叶、下胚轴四种外植体的再生能力进行
了比较,发现带柄的子叶再生频率最高,可作为建立青菜再生体系的适宜外植体。
基因型对再生也有重要的影响,不同基因型的再生能力有很大差异。在所用的个
青菜品种中,以香港菜心的再生频率最高,为,其它依次为苏州青、矮抗青、
上海青、高桦白菜。
为了能有效地杀除共培养后残余的农杆菌和筛选转化体,测定了青菜对种抗
生素的敏感性。经实验证明,离体培养的子叶对潮霉素的敏感性大于卡那霉素。因
此在青菜的遗传转化中应使用潮霉素作为筛选转化体,浓度以为宜。在所
用的梭节青霉素、氨节青霉素、头抱霉素三种抑菌抗生素中,根据它们对芽再生的
影响,应首选竣节青霉素。
为建立农杆菌介导青菜转化的稳定体系,以基因瞬时表达频率为指标,对
影响转化频率的几个重要因子进行了优化。通过对菌液浓度、感染时间、共培养时
的梯度实验得出,菌液浓度为、感染巧分钟、共培养天时,
瞬时表达频率达到最高。不同的农杆菌其转化效果不同,在所用的个农杆菌菌株
中,用转化时,瞬时表达频率高于。同一菌株与不同的质粒
组合,其转化频率也有差异,在菌株与种质粒和的
组合中,以印的转化频率最高。基因型对转化频率也有重要的影响,
在所用的个青菜品种中,以高桦白菜的
次为上海青、苏州青、矮抗青、香港菜心。丫时表达””高’为’’其它依
本文还研究了射线辐射处理对青菜离体再生和转化的影响。在再生试验时,
分别采用了射线处理外植体的供体—无菌苗和培养中的外植体。发现用
的剂量处理外植体能明显促进不定芽的再生。在转化时,分别对在感染前和感染后
对外植体进行了辐射处理。结果表明在感染后用低剂量处理有助于“‘瞬时表达的
提高。这一结果证明,在进行青菜的组织培养和转化时,辅以低剂量的射线处理,
可以提高再生和转化频率。
关键词青菜再生农杆菌介导转化辐射
勿
致谢
本论文是在导师崔海瑞副教授的悉心指导下完成的。三年的求学生涯中,导师
严谨的治学态度,渊博的知识,宽阔的胸怀一直是我学习的典范。导师一直对我言
传身教,细心关注我的科研进展和学习生活,特别是在论文完成期间倾注了大量的
血。值此论文完成之际,谨向他表示最衷心的感谢和最崇高的敬意。
在此期间,本研究方向的夏英武教授和舒庆尧教授曾在科研及生活上给予诸多
的关心、指导和帮助,谨向二位老师表示最诚挚的感谢。
本所老师徐步进教授、孙锦荷教授、高明尉教授、孙志明副教授、沈圣泉副教
授、傅俊杰副教授、赵小俊老师、张明龙副教授、吴志平副教授、昊殿星博士、包
劲松博士等曾给予热心的指导和帮助,在此向他们表示衷心的感谢。衷心感谢李兴
林博士后,在实验过程中他曾给予大力的帮助,并提供了许多宝贵的意见。
同时感谢张明洲博士、王忠华博士、谢建坤博士、池晓菲博士、吴关庭博士、
吴刚博士、舒小丽博士、陈善福硕士、谢小波硕士、沈希宏硕士、陈文岳硕士、朱
小杨硕士、王玉华硕士,还有我周围一起生活学习的同学们,他们伴我度过了一段
丰富多彩的日子,并给了我很多帮助,为我的人生留下了美好的回忆。
我的真挚感谢还要献给蒋爱兰女士,三年以来她时常关心我、帮助我,让我感
到无微不至的温暖。也要感谢周志丹先生和池小娟小姐在实验中的协助。
最后,感谢我的家人及我的朋友何建康先生,他们一直给予充分的理解和学习
上的支持,生活上的关怀和照顾,在此向他们表示最诚挚的谢意。
文中所用缩略语
脱落酸
氨节青霉素
节基腺嗦吟
苏云菌芽抱杆菌
梭节青霉素
氨唾肪头抱霉素
病毒外壳蛋白
氯毗咙基‘一苯基服
二甲基亚讽
葡萄糖醛酸糖昔酶
潮霉素
卡那霉素
细胞分裂素
蔡乙酸
核定位信号
光密度
多聚酶链式反应
聚乙二醇
蛋白质抑制因子
麟丝菌素乙酞转移酶
唾二哇苯基服
烟草花叶病毒
芜替花叶病毒
一一一一一澳氮一葡萄
糖醛酸环己基按盐
第一章文献综述
第一节白菜组织培养研究进展
白菜属十字花科芸墓属植物,是我国特产的蔬菜之