文档介绍：!" 卷# 期生物工程学报’()*!" +(*#
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用基于“!"#! $”的技术构建重组质粒
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李山虎,王健,李杰之,黄翠芬,周建光"
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军事医学科学院生物工程研究所,北京"$$I%$
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摘要根据重组工程原理,建立了一种用于构建重组质粒的“$%([ :”(抗生素[单酶切位点)选择与反选择新方法。首先采
用 GK/ 方法扩增出线性打靶分子:然后进行两步体内同源重组,(")$%([ : 基因敲入,重组子呈现$%( 抗性表型;(!)目的基因
替换基因。用限制酶消化时,发生第二步重组的分子不能被消化,能够转化大肠杆菌受体菌。应用该方
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法构建了重组质粒 9WHNM]5>21 GK"J$$=。GK/ 及测序鉴定证明:外源片段重组率为!$^,所建立的重组工程选择与反选择新技
术为质粒构建提供了新的解决方案。
关键词/04 重组酶,重组工程,反选择技术
中图分类号_I"! 文献标识码 8 文章编号"$$$MN$L"(!$$%)$#M$%!$M$#
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