实验一 还原糖和总糖的测定.doc

文档介绍：四、操作步骤 1. 制作葡萄糖标准曲线取7支 20mL 具塞刻度试管编号, 按表 1 分别加入浓度为 1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和 3,5- 二硝基水杨酸( DNS )试剂,配成不同葡萄糖含量的反应液。表1葡萄糖标准曲线制作管号 1mg/mL 葡萄糖标准液( mL ) 蒸馏水( mL ) DNS ( mL ) 葡萄糖含量( mg ) 光密度值( OD ? 540nm ) 002 1 2 3 4 5 6 将各管摇匀,在沸水浴中准确加热 5min ,取出,冷却至室温,用蒸馏水定容至 20mL ,加塞后颠倒混匀,在分光光度计上进行比色。调波长 540nm ,用0 号管调零点, 测出 1~6 号管的光密度值。以光密度值为纵坐标, 葡萄糖含量( mg )为横坐标,在坐标纸上绘出标准曲线。 2. 样品中还原糖和总糖的测定(1 )还原糖的提取准确称取 食用面粉,放入 100mL 烧杯中,先用少量蒸馏水调成糊状,然后加入 50mL 蒸馏水,搅匀, 置于 50℃恒温水浴中保温 20min , 使还原糖浸出。将浸出液( 含沉淀) 转移到 50mL 离心管中,于4 000r/min 下离心 5min ,沉淀可用 20mL 蒸馏水洗一次,再离心,将二次离心的上清液收集在 100mL 容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,作为还原糖待测液。(2 )总糖的水解和提取准确称取 食用面粉, 放入 100mL 三角瓶中,加 15mL 蒸馏水及 10mL 6M HCl ,置沸水浴中加热水解 30min (水解是否完全可用碘- 碘化钾溶液检查) 。待三角瓶中的水解液冷却后,加入 1 滴酚酞指示剂, 用 6mol/LNaOH 中和至微红色,用蒸馏水定容在 100mL 容量瓶中,混匀。将定容后的水解液过滤,取滤液 10mL , 移入另一 100mL 容量瓶中定容, 混匀, 作为总糖待测液。(3 )显色和比色取4支 20mL 具塞刻度试管, 编号, 按表 2 所示分别加入待测液和显色剂, 空白调零可使用制作标准曲线的 0 号管。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。表2样品还原糖测定管号