文档介绍：Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】
菌种鉴定标准操作规程
菌种鉴定标准操作规程
目的：建立菌种鉴定标准操作规程
范围：适用于******鉴定标准操作
职责：
内容：
1整体操作步骤
纯化、分离待鉴定菌
用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如TSA），划线分离，以出现微生物单菌落为止。
挑取纯化后的单菌落，进行革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。
如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。
如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。
假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。
选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。
2革兰氏染色
染色剂的配制
结晶紫染色液：
甲液：结晶紫
95%的酒精 20ml
乙液：草酸铵
水 80ml
将甲液和乙液混合均匀，静置48h使用，置密闭棕色瓶中储存。
碘液：
碘
碘化钾
水 300ml
配制时先用3～5ml水将碘化钾溶解，再加入碘，用力摇匀，使之全部溶解后，再加水稀释至300ml，摇匀，分装在棕色瓶中储存。
稀石碳酸红溶液:
碱性品红
石碳酸
95%乙醇
配制时用乙醇溶解碱性品红，然后加入石碳酸溶液，使用时加水稀释至100ml，摇匀。
操作:
涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。
干燥固定：涂片自然干燥或在酒精灯火焰上方微热烘干，并在火焰上通过2～3次，以固定涂片。
染色：在已固定的标本上滴加结晶紫溶液数滴，使染色液覆盖整个涂片标本，
染色1分钟。
水洗：斜置玻片使很细水流的纯化水从染色标本的上端流下，勿使水流直接冲刷涂片处，直至洗下的水呈无色为止。
滴加碘液冲去残水并媒染约1分钟，用纯化水冲去碘液吸干。
滴加95%的乙醇脱色约20～30秒，脱色时应将玻片微振动，使酒精分布均匀，立即用水冲净。
稀石碳酸红溶液染色1分钟后，用水洗净晾干或吸干。
镜检：先用低倍镜观察，找到适合的位置，再加一滴香柏油于涂片上，使用100倍物镜观察细菌革兰氏属性。革兰氏阳性菌染色成蓝紫色，革兰氏阴性菌染成红色，同时做阳性对照。
3简单染色
用于真菌与细菌的鉴别。
操作:
涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。
干燥固定：涂片自然干燥或在酒精灯火焰上方微热烘干，并在火焰上通过2～3次，以固定涂片。
染色：在已固定的标本上滴加结晶紫溶液数滴，使染色液覆盖整个涂片标本，染色1分钟。
水洗：斜置玻片使很细水流的自来水从染色标本的上端流下，勿使水流直接冲刷涂片处，直至洗下的水呈无色为止，自然晾干或吸干。
镜检：先用低倍镜观察，找到适合的位置，再加一滴香柏油于涂片上，使用100倍物镜观察菌体形态。
4 3%氢氧化钾试验
材料
3%KOH溶液（W/V）、无菌木质牙签、待检菌的新鲜纯培养物（18～24小时）。
操作
在一洁净的载玻片上等距离滴上3滴3%KOH水溶液。
用铜绿假单胞菌或具有等同反应的菌种作为阳性对照。