文档介绍：,认
一、
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胎儿间充质干细胞诱导
成骨分化和成脂肪分化的研究
研究生王秋英
帅赵存华教授
摘要
厂背景间充质干细胞是存在于多种人体组织中的多能干细胞,能自我更新
并在不同的诱导条件下可分化为多种造血以外组织,包括骨骼、软骨、骨髓基质、
肌肉、键、脂肪等。充质干细胞的高度自我更新能力使其成为逆转录病毒介导和
基因治疗的极好靶体。它还很容易从人骨髓中被分离得到并在体外经过许多倍扩
增、处理、重输回同一个病人,在这过程中,间充质干细胞还具有许多造血相关用
途。目前国外正在进行前临床和早期临床的安全研究实验而国内对间充质千细胞
的研究报道尚目的通过研究间充质干细胞在体外扩增分化成成骨细胞和成脂
肪细胞的体外诱导条件,为下一步研究体内成骨分化实验做准备,同时也为临床应
用骨髓间充质干细胞作细胞”代治疗提供实验室依拣色料和方法取胎,匕骨髓的
间充质干细胞,体外培养扩增至第二代或第三代时,分别以成骨分化液、成脂肪分
化液和对照液培养,建立生长曲线,分别检测钙化小结、碱性磷酸酶活
胜、矿化基质的形成及骨钙蛋白的基因表达、或脂肪滴与脂蛋白脂酶的基因表达等,
从而鉴定充质干细胞的成骨和成脂肪分化潜能。
结果
分别用对照、或体系培养时,其生长曲线基本相同。
在体系中培养天后细胞形态由原来的梭形变成了立方形
的细胞呈一阳性,而对照中的一阳性细胞较少染色发现在
培养中有明显的钙化基质沉积,而对照中从未见到此现象分析表明
经诱导分化培养后表达骨钙蛋白基因,而对照体系不表达或只有微量表达。
在体系中培养天后细胞形态变化多样,可见到折光度增加的液
泡充满整个细胞苏丹黑染色发现培养中细胞富含脂肪滴,而对照体系中的细
胞脂肪滴很少分析表明经诱导分化培养后表达脂蛋白脂酶基
因,而,寸照体系不表达或只有微量表达夕
小结认、
骨髓中存在一种数量极少、具有高度自我更新能力的间充质干细胞。
人间充质干细胞可在体外培养扩增,且在多次传代或冻存后仍具有向多种
间质组织系分化的潜能。
经培养扩增的人间充质干细胞能在体外被诱导分化成成骨细胞,而后者具
有成骨细胞的形态、碱性磷酸酶表达增加、形成矿化的细胞外基质和合成
骨钙蛋白等特征。
经培养扩增的人间充质干细胞能在体外被诱导分化成成脂肪细胞,产生富
含脂肪液泡并表达脂蛋白脂酶的细胞。
地塞米松依赖于组织培养基对的成骨分化和成脂肪分化都有明显的
刺激作用。
关键词间充质干细胞成骨细胞脂肪细胞地塞米松
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胎儿间充质千细胞诱导
成骨分化和成脂肪分化的研究
研究生王秋英
导师赵春华教授
前言
干细胞是具有保持自我复制能力且在适合微环境下具有多系分化能力的原始细
胞,间充质干细胞系是具有自我更新和多向分化增殖能力的原始骨髓细胞。自
年提出骨髓具有造血以外功能以来,人们逐渐认识到骨髓基质细胞是构
成造血微环境的主要细胞成分,并在造血调控中发挥重要作用。在此基础上,
年〕等人又确立了间充质干细胞的分离方法和培养条件,为进一步研究
它的细胞生理学特征、细胞表型和分泌细胞因子、多向分化潜能、支持造血及在基
因治疗与临床中的应用奠定了基础。
目前的研究认为间充质干细胞拥有多向分化潜能,在不同的诱导条件下可分化
为多种造血以外组织,包括骨骼、软骨、骨髓基质、肌肉腿、脂肪等。
年美国血液学年会就干细胞的可塑性作了专题研讨,等报道了经反复
多次实验证明成人多能干细胞可跨越胚层分化成神经干细胞等多项突破性进展。间
充质干细胞分化为各种间质组织特别是骨〕与软骨的潜能已被广泛研究。通过用抗
单核巨噬细胞抗一、抗内皮细胞抗一、抗淋巴细胞抗一
等抗体的阴性筛选去除循环造血细胞后,人基质细胞能同时表达成骨细胞系碱性
磷酸酶、骨钙素和骨桥蛋白和脂肪细胞系脂蛋白脂酶的特征基因,这些都表
明丛质细饱是独立的祖细胞。人骨髓基质中的成纤维细胞在有血清和至少四种生
长因子即血小板源性生长因子、成纤维细胞生长因子、转化生长因
子和上皮生长因子等存在时能在体外形成集落
等报道最初粘附的骨髓源性的基质集落中约有是多能的,具有在体外分化为成
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骨、成软骨和成脂肪细胞的能力。年用第代的间充质干细胞在含
有地塞米松,一抗坏血酸一磷酸酷,抗坏血酸和一磷酸甘油醋的培养液中培养
天,通过检测成骨细胞形态,碱性磷酸酶的表达,抗骨源性细胞表面单克隆抗体的
反应,骨钙蛋白的产生及形成细胞外含有矿物质的基质。间充质干细胞分化
成骨的潜能在第