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分子克隆技术实验操作手册.doc

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分子克隆技术实验操作手册.doc

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文档介绍

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分子克隆技术实验操作手册
LT
表达检测:在转录水平上研究和了解基因的表达与调控是分子生物学和基因操作的重要内容。本实验通过RT-PCR技术训练学生掌握RNA的抽提、反转录及PCR技术等。
分子克隆技术实验课是从事生命科学相关研究的学生从课堂走进实验室,顺利开展科研工作的必经之路。希望学生通过以上三个实验的综合训练能够为提高实际动手能力和实验自主设计能力打下坚实基础。
目 录
HYPERLINK \l "_Toc123790883" 系列一 分子克隆技术 5
HYPERLINK \l "_Toc123790884" 实验一 质粒的制备 5
HYPERLINK \l "_Toc123790885" 实验二 DNA的琼脂糖凝胶电泳 6
HYPERLINK \l "_Toc123790886" 实验三 外源DN***段在质粒载体中的克隆 8
HYPERLINK \l "_Toc123790887" 实验四 感受态细胞的制备 10
HYPERLINK \l "_Toc123790888" CaCl2感受态细胞的制备实验步骤 10
HYPERLINK \l "_Toc123790889" 电转化法制备大肠杆菌感受态细胞的实验步骤 11
HYPERLINK \l "_Toc123790890" 实验五 质粒的转化及转化子的鉴定 12
HYPERLINK \l "_Toc123790891" 热激法转化实验步骤: 12
HYPERLINK \l "_Toc123790892" 质粒电转化大肠杆菌感受态细胞操作步骤 13
HYPERLINK \l "_Toc123790893" 系列二 Southern技术 14
HYPERLINK \l "_Toc123790894" 实验一 植物总DNA的快速少量抽提(CTAB法) 14
HYPERLINK \l "_Toc123790895" 实验二 总DNA质量检测及酶切 15
HYPERLINK \l "_Toc123790896" 实验三 电泳、转膜 16
HYPERLINK \l "_Toc123790897" 实验四 Southern 杂交 18
HYPERLINK \l "_Toc123790898" 系列三 表达检测 24
HYPERLINK \l "_Toc123790899" 实验一 RNA Extraction (mini prep) 24
HYPERLINK \l "_Toc123790900" 实验二 RT-PCR (Reverse transcription PCR) 26
HYPERLINK \l "_Toc123790901" 实验三 RNA的电泳,转膜和杂交 28
HYPERLINK \l "_Toc123790902" 附录 试剂配方 29
HYPERLINK \l "_Toc123790903" 一 细菌培养试剂 30
HYPERLINK \l "_Toc123790904" 二 质粒抽提试剂 31
HYPERLINK \l "_Toc123790905" 三 DNA操作试剂 31
HYPERLINK \l "_Toc123790906" 四 RNA操作试剂 35
HYPERLINK \l "_Toc123790907" Stock Solution: 35
HYPERLINK \l "_Toc123790908" Work Solution 35
HYPERLINK \l "_Toc246383862" 系列一 分子克隆技术 5
HYPERLINK \l "_Toc246383863" 实验一 质粒的制备 5
HYPERLINK \l "_Toc246383864" 实验二 DNA的琼脂糖凝胶电泳 6
HYPERLINK \l "_Toc246383865" 实验三 外源DN***段在质粒载体中的克隆 8
HYPERLINK \l "_Toc246383866" 实验四 感受态细胞的制备 10
HYPERLINK \l "_Toc246383867" CaCl2感受态细胞的制备实验步骤 11
HYPERLINK \l "_Toc246383868" 电转化法制备大肠杆菌感受态细胞的实验步骤 11
HYPERLINK \l "_Toc246383869" 实验五 质粒的转化及转化子的鉴定 12
HYPERLINK \l "_Toc246383