文档介绍：第四军医大学
博士学位论文
核定位信号筛选系统的构建和基因文库的筛选以及核定位蛋白
功能的研究
姓名:王冀姝
申请学位级别:博士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:韩骅
本学位论文基于以下论文:跫芥铌兀钊伲锴浚芘簦琛:颂翘宓鞍跫芥缕迹锴浚芘簦@琛:硕ㄎ恍跫矫茫钊伲锴浚芘簦琛@煤硕ㄎ恍藕派生物物理学报。;:。因组学,第一版,北京:军事医学科学出版社,。物理进展淹冻。号捕捉系统的构建。中国生物化学与分子生物学报,选系统初步筛选小鼠胚胎核定位蛋白基因。生物化学与Q钕顺跸模饿紊鞅啵夯虼虬泻凸δ芑跫街耄铌兀钊伲锴浚芘簦琛:颂翘宓鞍/暮硕ㄎ恍藕诺姆治觥I锘в肷/硕ㄎ恍藕诺娜范ḿ捌舳臃治觥·,Ⅺ,,:。,.瓸甊.;.琂,琍
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.——一核定位信号筛选系统的构建和基因文库的筛选以及核定位蛋白功能的研究诮湍赶赴型梢苑⒒幼饔谩B4耍颐抢媒湍腹菇舜觕——————————————————————————————————————————一一兰架巡槔祭脊缋祭祭脊王冀姝师:韩骅教授第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室第四军医大学生物化学与分子生物学教研室越核孔复合物而进入细胞核。这个过程包括转运蛋白殖芅一结合蛋白清楚,但是这个转运系统在进化过程中非常保守。从酵母到哺乳类,核孔复合物的结构非常相似,转运蛋白也具有很高的同源性。因此,哺乳类蛋白的丈库中捕获核定位蛋白基因片段的遗传筛选系统一一核定位信号筛选系统。该系统包括两个部分:一是酵母穿梭栽体,可表达不含娜斯ぷB家蜃樱,以保证在没有嬖谑人工转录因子定位于胞浆而不能进入细胞核激活转录。二是酵母宿主,其基因组中含有由人工转录因子调控的报告基因。将文库插入人工转录因子下游的多克隆位点后转化酵母宿主。如果与人工转录因子融合表达的博士研究生:摘要转录因子及其它许多在细胞增殖、分化等方面发挥重要作用的蛋白如组蛋白、蚏聚合酶、庸さ鞍椎染谙赴四诜⒒幼饔谩4蠖嗍核内蛋白需要内源性的核定位信号,帮助其穿识别和结合带有牡鞍祝⑿渫?坑诤四ど希缓笠院哪艿闹鞫转方式使之进入细胞核。尽管核蛋白的胞浆一一胞核转运机制目前尚未完全并含有一个出核信号西安导\蒑
编码一斯ぷB家蜃泳涂山胂赴硕せ畋ǜ婊虻淖B迹硐治酵母可在选择性培养基上生长,反之则不能。因此利用这个方法理论上可以本研究的主要内容包括:的基因片段进行了验证,证实了该系统能够有效地甄别表达的融合蛋白中挠形蕖Q橹ち薔在蛋白质中的位置不会影响筛选的效果。中约ǎ海サ目寺】稍谘≡裥云桨迳仙ぁ序列分析表明%以上的克隆的插入片段可编码典型或不典型的⒂朐靥逯械娜斯ぷB家蜃诱确融合。用融合的方法验证它们在哺乳动物细胞中的定位,证实了这一系统能够有效地从丈库中筛选出核定位蛋白基因片段。因此这一系统可作为大规模筛选核定位蛋白基因的一种有效途径。从文库筛选出来的基因中,选取了两个基因,分别代表已知和未知、有典型臀薜型6运墙辛顺醪降墓δ苎芯俊琓/的研究:利用核定位信号筛选系统确定核糖体蛋白琑的奈恢茫⒃谔逋馀嘌南赴屑右证实。—,逐渐从核仁定位而成为全细胞核定位。⒍酝显子/内含子的结构进行了分析。疪钠舳雍卸嘀职动子具有持续激活的特点。訲/的表达和启动子的活性从丈库中筛选到所有的核定位蛋白基因。杓撇⒐菇撕硕ㄎ恍藕派秆∠低常靡阎5谋嗦隢和不编码∈笈咛サ膃目獠迦肷秆≡靥宓亩嗫寺∥坏悖;湍杆拗鳎杂交和的结果显示,在胚胎期和未分化的细胞中疪的表达量明显高于成熟组织和已分化的细胞。又称,。我们发现,疪钠第目军医大掌博士掌位口天&
阳甩旺堋全长的确实定位于细胞核中。挽嚷软件分析的结果将全长片段分为“细总之,本研究设计并建立了一个以酵母遗传体系为基础的核定位信号筛关键词:核定位信号,出核信号,基因克隆,酵母,小鼠,胚胎,髓好曲帕钢Ⅺ疞中的疪侗鹦蛄卸訲的反式激活有促进作用,而我们又发现疪芄挥隩直接进行相互作用,所以,作用于疞及细胞蛋白质的合成,从而促进了病毒感染细胞的增生和病毒基因组的复制。此外,疪谋泶锘故艿和的调控。总之,疪赡芡ü嘀滞揪恫斡肓讼赴脑錾⒎碌暮说鞍譐难芯浚何颐巧秆〉揭桓龉δ芪