文档介绍：Research Paper 研究报告
微生物学报 Acta Microbiologica Sinica
48(5):589~595; 4 May 2008
ISSN 0001-6209; CN11-1995/Q
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一株产紫杉醇罗汉松内生真菌的分离和鉴定
孙端方1, 冉雪琴1, 王嘉福1,2*
(1 贵州大学动物科学学院, 2 农业生物工程省级重点实验室, 贵阳 550025)
摘要:【目的】紫杉醇是重要的抗癌药物,主要从罗汉松等植物中提取,为了保护罗汉松等种质资源,
本文从罗汉松植株中分离产紫杉醇内生真菌,并对内生真菌所产紫杉醇的抗肿瘤活性进行了分析。
【方法】采用组织块法自罗汉松的根、茎、叶等组织中分离内生真菌;通过四唑蓝(Methyl Thiazolyl
Tetrazolium, MTT)比色法筛选有抗肿瘤活性的内生真菌菌株,通过薄层层析(Thin Layer Chro-
matography, TLC)和高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)对内生真菌
所产活性物质进行鉴定;采用抽提法抽提内生真菌所产紫杉醇,应用 Vero 细胞对抽提的紫杉醇的活
性进行了分析。【结果】从罗汉松属(Podocrapus)植物中分离到 155 株内生真菌,其中 28 株内生
真菌具有较高的抑癌活性。将其中一株菌株 A2 命名为 EPTP-1,经形态学和分子分类学分析鉴定为
烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。菌株 EPTP-1 中抽提的紫杉醇 μg/L~ μg/L 作用 24h 表现
出明显的致细胞凋亡作用。菌株 EPTP-1 发酵 5 天时紫杉醇的产率为 ± mg/L。【结论】
从罗汉松中分离到了一株产紫杉醇内生真菌 EPTP-1,可作为紫杉醇类药物工业化生产的候选菌株。
关键词:罗汉松;内生真菌;紫杉醇
中图分类号:Q939 文献标识码:A 文章编号:0001-6209 (2008) 05-0589-07
植物内生真菌(Endophytic fungi)生活在植物体化学合成途径[7]通常以紫杉醇的前体为原料,但合成
内或一定阶段处于植物体内,包括菌根真菌和植物病过程的中间产物复杂且副作用不清楚,缺乏安全保
原菌[1];由于内生真菌与其宿主植物的长期共生,很障;近年来,出现了以植物细胞、或组织培养方法生
可能传递或吸收了遗传物质/酶,或者通过共进化获产紫杉醇[8],但由于培养条件严格难以规模化生产;
得了相似的基因[2],从而具有相同的合成次生代谢产因此通过微生物发酵方法生产紫杉醇具有远大的发
物的能力。展前途,不仅能获得生理活性与植物来源一致的紫杉
紫杉醇(Taxo1) [3]表现出广泛的抗肿瘤活性, 醇,同时还具有成本低、易于工业化生产等优点。
尤其对卵巢癌、乳腺癌、肝癌等具有显著的疗效[4]。迄今,产紫杉醇内生真菌菌株主要从濒危物种红
1993 年 Stierle 等[5]首次从太平洋短叶红豆杉中分离豆杉科(Taxaceae)中分离,却忽略了与红豆杉亲缘
到产紫杉醇内