文档介绍：泸纠蜃学院研究生硕士学位论文结核分支杆菌疕嵌合呙绲真核表达与免疫效应研究丫凼型堂鳢鑫研究生姓名庞凰学科、专业导师姓名熬援迥晡逶中图分类号:;虿二
结核分支杆菌疕嵌合呙的真核表达与免疫效应研究摘要目的:⒖ń槊、隤联合免疫的免疫效应,为研制更安全有效的结核分支杆菌疫苗,有效的防治结核病奠定基础。教衷銮拷岷朔种Ц司鶤与逗螪疫苗免疫效应的途径,进一步提高嵌合呙缭诮岷瞬≈械脑し篮椭瘟谱饔谩7法:甈嵌合呙缭谡婧讼赴谋泶铮喝”臼夜菇ǎ经测序正确,保存于甤闹柿..瓵,增菌,提取质粒,测定质粒浓度。将各组质粒浓度稀释为啊街郑直鹩糜谧H菊婧讼赴投锩庖摺O胞培养:取冻存的赴此眨嘌鄄天,取生长状态良好,接近%铺满瓶底时的细胞,接种于六孔细胞培养板,每孔加入个细胞,继续培养小时,用于转染。转染前吸出培养板中的旧培养液,加入不含抗生素及血清的培养液;将已稀释为∥闹柿O钟,,换为含血清不含抗生素的培养液,小时后收集细胞,裂解,使用絋躌抽提试剂盒进行樘帷捎肕徊椒ㄍ瓿桑訮琍R上游引物/,.
狝/谡婧讼赴谋泶锴榭觥动物实验:封闭群、雌性、,=崧郏游引物:缮虾Iず铣,分为阴性对照组.、狝/。デ碇悄缪沟缬种樱中国昆明鼠共只。随机数字表法编号,按随机表顺序分为椋孔与狧联合免疫组组。分笼饲养观察天无异常后,用%盐酸普鲁卡因预处理小鼠/只∪注射部位为小鼠双侧后腿股四头肌。旌笤谙嗤课蛔骷∪庾⑸涿庖撸基础免疫/只旄骷忧棵庖/只次,旌采血,收集血清,、:甈—、椤组、狝与:厦疫组、狝/榈男∈笱G灏紫赴樗兀依次为:.±.痬±/、±/;自细胞介素一来瓵/逗螪疫苗组小鼠血清中的白细胞介素..干扰素水平最高,:厦庖咦樾∈笱G逯械陌紫赴樗饕、扰素水平较生理盐水组、畁组、楦撸钜煊邢灾:只,即生理盐水组、、、瓵/、..痬.∥、./、..:±.痬./、为:。/、./、.蝝±.痬±.痬
。岷朔种Ц司狝/逗螪疫苗在小鼠中有较强的免疫效应,具备潜在的预防和治疗作用。岷朔种Ц司鶳—疕嵌合呙缬啾饶苊飨蕴岣哐G逯械陌紫赴樗兀、扇潘厮剑砻鞔饲逗呙缈捎行Ъせ钚∈骉细胞的免疫活性,具有更强的免疫效应。甈—疕嵌合呙绫认嗤亮康腜—.联合免疫产生的免疫效应更强,证明嵌合能更好的提高呙绲拿庖效果。染关键词:结核分支杆菌;疫苗,豢乖,热休克蛋白;转
..猠:篢琋,猲琋珺珺琍,,狝/,—,,,琲甊:狝//,....痬/,
,../;.:瓵/甋疕甌·疉
骎腥居泄亍N夜鼋岷瞬「叻⒐,从ァゲ坏群甏踉谀嫌《鹊难近年来随着人口流动增加、爱滋病蔓延以及新型结核菌株,多重耐药菌株的出现,结核病一改过去逐年递减的趋势,发生回潮,病例数明显增加,发病率以每年%的速度递增,成为死亡率最高的感染性疾病。迄今为止,全球约三分之一人口受到结核杆菌感染,每年死亡人数嗤颍其中约蛉烁腥灸鸵┙岷烁司%的结核新病例与人免疫缺陷病毒感染结核杆菌,现有活动性肺结核患者约颍拘郧縐R虼嗽し接种对结核病的控制和消灭起着关键性的作用。目前卡介苗魑Nㄒ涣俅彩褂玫囊呙纾し佬Ч⒉晃榷ā是由一株患结核性乳腺炎的奶牛身上分离到的牛型结核分支杆菌,经过瘟ù醵径ザ玖Γ昶鹪谌澜绻惴菏褂茫っ鞫远童血行播散性结核病,结核性脑膜炎的保护力十分显著,但对肺结核的免究结果是无效的,几乎否定了拿庖弑;ぷ饔茫矣斜ǜ婷庖呷毕病人鏏接种梢鹑聿ド⑿愿腥径劳鯷。等研究发现诖ù讨形4锏郊醵灸康模チ艘恍┍嗦刖哂忻庖弑护作用的抗原基因:和R丫芯糠⑾諶中有编码,幕颍珽墙岷朔种Ц司匾的保护性抗原,。同时慕又只崾菇岷司厥匝檠粜裕越岷瞬〉诊断产生干扰,延误治疗时间,因此研制新疫苗成为当前结核病防治的首剐置
因的表达产物。年掣进行了首次呙缡笛椋哟朔⒄沽年仁状谓ù炕腄肌肉注射小鼠发现可产生相应基呙缧录际酢暧ⅰ⒎ā⒚馈⒌ぢ笏墓ḿ液献魍瓿闪私岷朔支杆菌的染色体全庑蚬ぷ鳎岷朔种Ц司埠,罨裕约个基因,为结核病疫苗的改造及重组呙缣峁┝擞欣奶跫~些编码具有免疫保护作用的保护性抗原基因成为结核病呙缪芯的热点。目前研究最多的是、复合体、、.,可诱导小鼠产生很强的细胞和体液免疫反应,抵御结核分支杆菌的攻击。等【拷ń岷朔种Ц司鶫抗原基因克隆到巨细胞病毒启动子下构建成呙纾⑾纸岷朔种