文档介绍：凝胶层析与离子交换层析结合法纯化地鼠肾细胞狂犬病疫苗
Purification of hamster kidney cell rabies vaccine
by gel and ion exchange chromatography
作 者 姓 名：杨莲花
领域（方向）：制药工程
指 导 教 师：王毅 教授
类 别：工程硕士
答 辩 日 期： 2015 年 6 月 6 日
前 言
分离纯化是现代生物技术药物制造工艺的核心，是决定产品的安全和
成本的技术基础。随着 2010 版《中国药典》对人用地鼠肾细胞狂犬病疫
苗中蛋白含量标准的提高，分离纯化技术再一次成为生物药企着重研究的
对象。
本论文围绕着凝胶层析和离子交换层析组合使用的方法展开，本人所
在的纯化组对层析柱的使用进行了长期跟踪实验，将两种层析柱以三种方
式组合纯化实验样品，通过对最终纯化液的检定，确定适用于生产的较优
的组合方式。
层析柱的使用在生物医药领域也是一个热门研究的课题，各个实验也
有着不同的论点，本实验依托着药企自身特点和生产需要展开，只是沧海
一粟，其中难免有不当或疏漏之处，请各位老师及同行前辈批评指正，以
求完善。
I
凝胶层析与离子交换层析结合法纯化地鼠肾细胞狂犬病疫苗
摘要：2010 版《中国药典》中人用狂犬病疫苗中的蛋白含量标准提
高，要求纯化后未加稳定剂的病毒液中总蛋白含量不高于 80µg/剂，牛血
清蛋白残留应不高于 50ng/剂，成品中宿主细胞蛋白残留不高于 24µg/剂，
提高纯化分离效果则是生物药企要攻克的问题之一。长期以来在层析系统
应用的摸索实验中显示，凝胶层析（Speharose 4Fast Flow，4FF）对宿
主蛋白和牛血清蛋白分离效果较好，工作条件温和，但实际生产应用中由
于样品杂质含量高，容易将层析柱进液口及凝胶孔径堵塞，延长分离时间
而影响分离效果；离子交换层析(Core700)，分辨率高，胶体积小，清洗
方便，上样量大，分离时间短，在生物医药等领域得到广泛应用。本次实
验 将 凝 胶 层 析 与 离 子 交 换 层 析 按 照 core700-core700-4FF ，
Core700-4FF-4FF，Core700-4FF-Core700 三种不同顺序组合使用，对实
验样品进行纯化分离。本实验分为两部分：第一部分，选取 3 批实验样品，
每批样品均按上述三种组合方法进行纯化分离，根据纯化后的总蛋白含
量，宿主蛋白含量，牛血清蛋白含量，抗原含量，确定能达到药典标准的
组合方式。经实验 1 得到，两种层析柱以Core700-4FF-4FF 的组合方式使
用时，分离效果较优于其他两种组合方式。第二部分，根据实验 1 的结果，
将另外 3 批实验样品按照 Core700-4FF-4FF 的组合方法进行验证实验，检
测最后纯化液的总蛋白含量、宿主蛋白含量、牛血清蛋白含量、抗原含量。
通过两部分实验，两种层析柱以Core700-4FF-4FF 的组