文档介绍：专业学位硕士学位论文

免疫共沉淀与质谱联用检测 TRIM3 相互作用蛋
白
Co-IP with MS for investigating the interacting protein of TRIM3

作者姓名：孙静静
工程领域：生物工程
学号： 31507129
指导教师：伍会健教授
完成日期：

大连理工大学
Dalian University of Technology
大连理工大学专业学位硕士学位论文
摘要
鉴定已知蛋白的相互作用蛋白为探究其蛋白功能和分子机制提供重要依据。确定蛋
白的相互作用的方法之一是免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，co-IP）后进行质谱
（mass spectrometry，MS），这种方法可以确保从生理条件下的细胞或组织中分离、鉴
定靶蛋白和其相互作用蛋白。
本文主要先通过 Co-IP 与 LC-MS 联用检测 TRIM3 的相互作用蛋白，后对检测的结
果分析、筛选，再通过分子生物学实验进一步验证质谱检测结果，且在宫颈癌和乳腺癌
细胞中探究 TRIM3 的功能，与质谱结果对照。本课题研究的主要工作是：
（1）通过 Co-IP、LC-MS/MS 联用检测 HeLa 细胞中能与 TRIM3 相互作用的蛋白，
对这些蛋白的定位、功能和作用进行统计、分析，来更全面的探究在复杂的细胞内环境
中，TRIM3 是如何发挥其功能的。本文检测到了 227 个能与 TRIM3 相互作用的蛋白质，
这些蛋白中有部分是 p53 信号通路的重要成员。
（2）通过质谱筛选出 p53 信号通路后，进行 Western Blot、免疫印迹等实验检测
TRIM3 与重要抑癌蛋白 p53 间的作用，结果显示 TRIM3 可以使 p53 蛋白水平下调。通
过荧光素酶报告基因检测 TRIM3 对 p53 靶蛋白 p21 启动子活性的影响，结果显示在缺
失 p53 时 TRIM3 不能影响 p21 的转录，而 p53 存在时 TRIM3 通过下调 p53 来抑制 p21
的转录。
（3）探究 TRIM3 在宫颈癌细胞系和乳腺癌细胞系中的作用。实验方法如下：通
过 RT-PCR 检查 TRIM3 在不同细胞系中 mRNA 水平的表达情况，结果显示中 T-47D 中
TRIM3 表达较多，HeLa 中 TRIM3 表达较少；通过 MTT 和克隆形成实验检测 TRIM3
对细胞增殖能力的影响，结果显示 TRIM3 可以显著抑制宫颈癌细胞系和乳腺癌细胞系
的增殖，而这不依赖于 p53；通过划痕实验检测 TRIM3 对细胞迁移能力的影响，TRIM3
不能影响细胞的迁移；通过流式细胞术检测 TRIM3 对细胞周期的影响，在有 p53 存在
时 TRIM3 才能影响细胞周期进程。
本