文档介绍：山东农业大学
硕士学位论文
蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质研究
姓名:秦晓春
申请学位级别:硕士
专业:食品科学
指导教师:乔旭光
20040520
触趟论文作者签名:扭寿关于学位论文原创性和使用授权的声明以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人所呈交的学位论文,是在导师指导下,独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体,均在文中明确说明。本声明的法律责任由本本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定,同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可保密论文在解密后应遵守此规定。人承担。导师签期曰名
英文缩略表醋酸钾中文名称氨苄青霉素碱基对刀豆凝集紊琼脂糖凝集二乙氨基乙基纤维素羟基磷灰石醋酸钠聚合酶链式反应姿徇炼呷苯甲基磺酰氟缩写英文名称重蒸水乙二胺四乙酸二钠大肠杆菌异丙基..涣虼肴樘苷培养基聚乙二醇聚乙二醇十二烷基硫酸钠狟—猤—
三羟甲基氨基甲烷—郾0纺旱缬葡聚糖凝胶一一籭—.·缓冲液琋,琋’一四甲基乙二胺琋,琋’蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质研究.,§
摘要展开研究具有十分重要的现实意义。本试验以大蒜鳞茎为原料,依次采铵分级沉淀法:通过—缀筒阄觯玫酱炕妒大蒜鳞茎中存在两种不同的蒜氨酸酶:命名为酶⒚涪颍渲忻涪蚴⒋笏馑獍彼崦赴被嵝蛄械牟舛ù酉仕饬劬ブ刑崛∽躌,大蒜是我国传统的药食两用资源,其功能性风味物质一一蒜素类物质是大蒜的药理基础,大蒜蒜氨酸酶诓美辔镏实过程中起到重要的酶促催化作用。大蒜功能性风味物质的提取缛率与蒜氨酸酶的活性调控有密切联系,因此首先围绕大蒜蒜氨酸酶的酶学性质用缓冲液粗浸提法、恋矸ā猄亲和层析柱法、羟基磷扶石柱层析法分离纯化出蒜氨酸酶,并采用变性凝胶电泳鉴定其纯度:通过方法扩增出蒜氨酸酶基因,从测得的序列推测出其氨基酸序列;并进一步研究了大蒜蒜氨酸酶亚基分子量、糖肽键类型等方面的酶学性质及其动力学特性。主要试验结果如下:⑺獍彼崦傅姆掷氪炕匝槭紫韧ü蛩犸Х旨冻恋砗蚉分级沉淀的选择,确定用%运獍彼崦复置敢航兄苯映淀,其纯化倍数为叮厥章ィ飨杂庞ァチ蛩倍的蒜氨酸酶酶液,,,回收率为.%。,经亲和层析纯化后的酶无杂蛋白带。⒚窱、酶Ⅱ的鉴定在亲和层析操作中,发现主要部分,酶钚越先酢C涪蜃詈笤俨捎敏腔谆沂讲阄龇ù采用—椒ɡ┰龀鏊獍彼崦富颍硬獾玫膃蛄型撇獬鏊氨酸酶的氨基酸序列。⑺獍彼崦傅拿秆灾什捎媚颍甋—法测定酶⒚涪虻亚基分子量分别为,;酶Ⅱ含糖量为ィ⑼撇馄涮肽键类型为停贤饪杉柰贾な盗烁ɑ姿徇炼呷┑拇嬖凇6蒜氨酸酶的动力学研究表明:在本实验规定的酶活测定条件下,酶反应化,,回收率为.%。山东农业人学硕二学位论文
性与保存温度有很大的关系,随着温度升高酶活降低的程度越来越大。关键词:大蒜;蒜氨酸酶;性质罴盐露任琾滴榷ǚ段~C傅奈榷以合成的幌┍话腚装彼嵫琼课5孜铮舛ㄋ獍彼崦付愿玫孜锏拿氏常数./畲蠓从λ俣萔/的最佳为蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质研究。
.,.—,,.%.ィ甎產.%ィ,’.—%琤瓼;.琣,—瓵瑆瓵瑃—
篻籥;琣/..篒..痬.
古希腊等地中海沿岸国家栽培;公元前年,由张骞从西域引入中国陕西汉中地区,以后遍及全国;兰统醮肴毡荆兰颓耙独┱沟肪、蛋白质、微量元素、氨基酸、维生素、硫化物等。不同产地的大蒜锗和硒的含量也较高恢芊迹。大蒜中氨基酸种类比较全,其周芳,3鲜龌С煞滞猓笏庵谢购卸嗵恰⒛罗马人就一直用大蒜治疗多种疾病。大蒜味辛性温,有驱风、利尿、,其主要食用部分为鳞茎。它原产于欧洲南部和亚洲西部,最早在古埃及、古罗马和非洲和南美洲,世纪后叶北美洲开始栽培,现在已遍及全世界,我大蒜的化学成分较复杂,也较齐全,其中含有大量对人体有益的脂都含有相同的化学成分,只是含量随产地、品种的不同有所差异。大蒜中矿物质含量以磷最高,其次为镁、钙、铁、硅、铝和锌等,另外有机中精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、缬氨酸的含量较高,蛋氨酸的含量较低,白皮蒜的必需氨基酸含量低于红皮蒜,但氨基酸总量略高于红皮蒜.,和一些酶类缢獍彼崦浮过氧化物酶、还劝滨Wk拿傅从古至今,世界上许多民族如埃及人、犹太人、中国人、日本人、咳、暖脾健胃、促进食欲、帮助消化、消渴止血、行气消积、解毒杀虫等功效,特别引人注目的是其强烈的抗菌性和强壮作用.