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纸层析的实验报告
篇一：纸层析法分离氨基酸实验报告
　　前言
　　纸层析法纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一种分离技术。。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。它是一种以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。
　　纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。纸层析法是用滤
　　纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。
　　在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。在
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　　做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。
　　纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。
　　氨基酸氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食品、医药、添加剂及化妆品行业。随着生物工程技术产业的发展逐渐成为2l世纪全球的主要产业之一，氨基酸的需求量越来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。目前全世界氨基酸每年的产量为100万吨，而需求总量是800万吨。我国自20世纪60年代起，氨基酸的应用在食品工业占61％，在饮料工业占30％，医药、日用化工、农业、冶金、环保、轻工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。
　　氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用：
　　(1)在食品行业的应用
　　(2)在医药工业的应用
　　(3)在饲料添加剂行业的应用
　　(4)在化妆品行业的应用
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　　(5)在农业上的应用
　　(6)在其他行业的应用
　　氨基酸工业还有着广阔的发展前景：
　　(1)传统的氨基酸生产方法
　　(2)运用基因工程手段生产氨基酸
　　(3)大力发展药用中间体,具体为：
　　①氨基酸及其衍生物逐渐成为药用中间体
　　②非天然氨基酸是合成活性药物的重要原料
　　③生产高附加值的非天然氨基酸
　　一、实验目的
　　(1)掌握分配层析的原理，学衡、展层、显色）。
　　(2)学习未知样品的氨基酸成分（水解、层析及鉴定）分析的方法。
　　二、实验原理
　　(1)纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流过固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。
　　(2)溶质在滤纸上的移动速度用比移值Rf值表示。
　　(3)Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。
　　(4)在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。材料与方法
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　　三、实验装置与试剂
　　(1)氨基酸标准液(1mg/ml)
　　亮氨酸、甘氨酸和脯氨酸标准液。
　　(2)80%甲醇
　　(3)%茚三酮丙酮溶液
　　(4)氨基酸混合液(每种氨基酸500mg/mL)
　　(5)正丁醇
　　实验仪器
　　(1)新华滤纸×1
　　(2)培养皿×1
　　(3)电热鼓风干燥箱×1
　　(4)吹风