文档介绍：流式细胞仪简介和使用方法
第一部分
流式细胞仪标本准备
染色的一般原则及方法
标本来源：
外周血、骨髓、组织块、培养细胞、脱落细胞及其他。
根据各种具体实验，选用不同的抗凝剂。
可用的抗凝剂如下：
EDTA： 2mg/ml
枸椽酸钠：%
肝素：15IU/ml
标本处理时间：
新鲜样本分析时，样本采集后应立即分析
样本固定方法：
1%的多聚甲醛或75%的酒精，作用30分钟。
注：不同的实验，所用的固定方法不完全相同。
样本处理标准试剂：
一、10%Bovine Serum Albumin BSA
1. 溶解10g BSA至100ml蒸馏水中
2. 4ºC，20000 g离心30分钟
3. 分装后-20ºC保存
二、% BSA-PBS缓冲液
1. 准备500ml， PBS
2. 加入5ml 10% BSA
3.
三、***化铵溶血剂
1. NH4CL,1g KHCO3和37mg Na2EDTA
2.
3. 在使用前配置该溶血剂，
方法一：溶血法
取100 ul抗凝全血；
2. 快速加入 2ml NH4CL溶血剂,混匀；
3. 室温孵育10分钟；
4. 4ºC，400g离心10分钟。去上清，加入2ml BSA-PBS；
5. 4ºC，400g离心10分钟。去上清，加入2ml BSA-PBS；
6. 4ºC，400g离心10分钟。去上清，调整细胞浓度至5x106/ml。
富集白细胞
注：化学试剂直接作用于红细胞的溶血剂有：以草酸为主的溶血剂（Coulter Q-Prep），基于NH4CL的BD公司的FACSLyse溶血剂。
优点：溶血时间快？？？，在流式细胞仪上可清楚地将淋巴、单核、粒及红细胞碎片相区分。
缺点：需严格掌握溶血时间，对白细胞表面抗原有影响，随时间细胞形态变化大。
方法二：密度离心法提取单个核细胞
Histopaque 1077为Ficoll与Sodium diatrizoate(泛影酸钠)混合物，～。通过离心可将全血中的粒细胞与单个核细胞分离。～，。
1. 准备2ml抗凝血（根据实验要求确定用血量），
等量PBS稀释；
2. 准备1ml Histopaque 1077 (Sigma)；
3. 室温下700g离心30分钟；
4. 仔细将含有单个核细胞血浆层吸出；
5. 加4ml BSA-PBS，400g离心10分钟；
6. 加2ml BSA-PBS清洗2次。
操作