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【实验题目】微生物生理生化实验【实验目的】
1. 了解生理生化的意义。
2. 掌握几种常用生理生化的实验方法。
【实验器材】
1、菌种：
枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，变形杆菌，产气肠杆菌
2、试剂：
卢戈氏碘液、***、吲哚试剂、***红试剂、蒸馏水等
3、仪器和用具：
酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等
4、培养基
淀粉培养基、油脂培养基（大分子物质水解实验）
葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内附倒置的德汉氏小管）（糖发酵实验）
蛋白胨水培养基（吲哚实验）
葡萄糖蛋白胨水培养基（***红培养基）
【实验原理】
在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。具体实验原理如下：
一、大分子物质的水解实验原理
1、淀粉水解
由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶 , 通过加水裂解大的物质为较小的化合物使其能被运输至细胞内。如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精 , 双糖和单糖，能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。已知淀粉遇到碘会显现蓝色，因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉，菌落周围不呈蓝色，出现无色透明圈，则该菌种能够水解淀粉。
2、油脂水解
脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，而产生的脂肪酸可改变培养基的 PH,因此在油脂
培养基上接种细菌，培养一段时间后可通过观察菌苔的颜色判断菌种是否能够水解油脂，若出现红色斑点，则说明这种菌可产生分解油脂的酶。
二、糖发酵实验原理
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要•绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异•有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸,醋酸,丙酸等）和气体（如氢气,甲烷,二氧化碳等）；有些细。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最
图1糖发酵实验
后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
A培养前的情况
B培养后产酸不产气
C培养后产酸产气
三、IMViC实验
1、吲哚实验
用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，贝冋将蛋白胨中的色氨酸分解为***酸和吲哚，吲哚与对二***氨基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
2、***红实