文档介绍：第四节基因表达
基因表达是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。
基因工程中基因高效表达研究是指外源基因在某种细胞中的表达活动,即剪切下外源基因片段,拼接到另一个基因表达体系中,使其能获得原生物活性又可高产的表达产物。
最佳的基因表达体系:目的基因的表达产量高、表达产物稳定、生物活性高和表达产物容易分离纯化。
一、宿主细胞的选择
适合目的基因表达的宿主细胞应满足以下要求:
容易获得较高浓度的细胞;
能利用易得廉价原料;
不致病、不产生内毒素;
发热量低、需氧低、适当的发酵温度和细胞形态;
容易进行代谢调控;
容易进行DNA重组技术操作;
产物的产量、产率高,
产物容易提取纯化。
宿主细胞分为两大类:
第一类为原核细胞:常用有大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、链霉菌等;
第二类为真核细胞:常用有酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞等。
⒈原核细胞
⑴大肠杆菌
因为大肠杆菌的分子遗传学研究深入,生长迅速,所以目前仍是基因工程研究中采用最多的原核表达体系。
表达基因产物形式多样:细胞内不溶性表达(包含体)、细胞内可溶性表达、细胞周质表达等。
大肠杆菌中的表达不存在信号肽,产品多为胞内产物,提取困难。
因分泌能力不足,真核蛋白质常形成不溶性的包含体,表达产物需经变性复性才恢复活性。
蛋白质不能糖基化。
产物蛋白质N端多余一个蛋氨酸残基。
其内毒素很难除去。
⑵枯草芽胞杆菌
分泌能力强,蛋白质不形成包含体。产物蛋白质不能糖基化。有很强的胞外蛋白酶对产物降解。
⑶链霉菌
作为外源性基因表达受到重视。不致病、使用安全、分泌能力强、表达产物可糖基化。