文档介绍：第九节基因工程药物的质量控制
是利用活细胞作为表达系统,产物的分子量较大,并有复杂的结构,还参与生理功能的调节,用量极微,任何质和量的偏差都可贻误病情造成严重危害。
宿主细胞中表达的外源基因,在转录翻译精制工艺放大过程中都可能发生变化,故从原料以及制备全过程都必须严格控制条件和鉴定质量。
一、原材料的质量控制
原材料的质量控制是确保编码药品的DNA序列的正确性,重组微生物来自单一克隆,所用质粒纯而稳定,以保证产品质量的安全性和一致性。
根据质量控制要求应了解以下
特性:
⒈明确目的基因的来源、克隆经过,并以限制性内切酶酶切图谱
和核苷酸序列予以确证;
⒉应提供表达载体的名称、结构、遗传特性及各组成部分(如复制子、启动子)的来源与功能,构建中所用位点的酶切图谱,抗生素抗性标记物;
⒊应提供宿主细胞的名称、来源、传代历史、检定结果及其生物学特性;
⒋须阐明载体引入宿主细胞的方法及载体在宿主细胞与载体结合后的遗传稳定性;
⒌提供插入基因与表达载体两侧端控制区内的核苷酸序列,详细叙述在生产过程中启动与控制基因在宿主细胞中表达的方法及水平等。
二、培养过程的质量控制
在工程菌的贮存中,要求种子克隆纯而稳定;
在培养过程中,要求工程菌所含的质粒稳定,始终无突变;
在重复生产发酵中,工程菌表达稳定;
始终能排除外源微生物污染。
生产基因工程产品应有种子批系统,并证明种子批不含有致癌因子,无细菌、病毒、真菌和支原体等污染,并由原始种子批建立生产用工作细胞库。
原始种子批须确证克隆基因DNA序列,详细叙述种子批来源、方式、保存及预计使用期,保存与复苏时宿主载体表达系统的稳定性。
对生产种子,应详细叙述细胞生长与产品生成的方法和材料,并控制微生物污染;提供培养生产浓度与产量恒定性数据,依据宿主细胞-载体系统稳定性,确定最高允许传种代数;