1 / 14
文档名称:

pcr扩增目的基因.ppt

格式:ppt   大小:214KB   页数:14页
下载后只包含 1 个 PPT 格式的文档,没有任何的图纸或源代码,查看文件列表

如果您已付费下载过本站文档,您可以点这里二次下载

分享

预览

pcr扩增目的基因.ppt

上传人:回忆笑一笑 2021/10/5 文件大小:214 KB

下载得到文件列表

pcr扩增目的基因.ppt

文档介绍

文档介绍:任务二: PCR扩增目的基因
2021/3/10
1
一、实验目的
1、掌握PCR扩增DNA的技术与原理
2、学****PCR扩增仪的使用
2021/3/10
2
二、实验原理
聚合酶链式反应是一种体外DNA扩增技术,具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等特点。
PCR工作原理类似于DNA的体内复制过程,是将待扩增的DN***段和与其两侧的已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷酸作为引物,引物序列将决定扩增序列片段的特异性和片段长度。
2021/3/10
3
标准的PCR过程分为三步:
  (92℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA
  (37℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
  (72℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延伸,合成与模板互补的DNA链。
2021/3/10
4
2021/3/10
5
三、实验仪器
PCR扩增仪
台式高速离心机
移液器
高压灭菌后的Eppendorf管( )
电泳仪
2021/3/10
6
四、材料与试剂
1、模板DNA():用牙签挑取单 菌落悬浮到50μL的裂解液中(1%TritonX- 100,20mmol/LTris-,2mmol/L EDTA),95℃温浴10min,10000r/min
离心5min,取2μL上清液用于总体积50μL的PCR反应。
2021/3/10
7
2、TaqDNA聚合酶(5U/μL),10×扩增
缓冲液,dNTP(1mmol/L):购买。
3、引物(100pmol/L):设计并合成与目的DNA两侧互补的引物。
2021/3/10
8
五、实验操作

(1)按序将如下成分混合置于Eppendorf管内
×扩增缓冲液 10μL
×dNTPs 8μL


1μL(10ng)
()
加水至V终=100μL
2021/3/10
9
(2)手指轻弹Eppendorf管底部
离心2s
(3)加石蜡油50μL封住溶液表面
2021/3/10
10

最近更新

剪花边美术市公开课获奖教案省名师优质课赛课.. 5页

2024年产品销售合同模板锦集8篇 28页

刷刷刷市公开课获奖教案省名师优质课赛课一等.. 4页

英文商业计划书宠物店 4页

初唐诗坛市公开课获奖教案省名师优质课赛课一.. 6页

花艺轻酒馆项目商业计划书 4页

初中美术纹样市公开课获奖教案省名师优质课赛.. 6页

初中物理北师大版市公开课获奖教案省名师优质.. 4页

初中投掷市公开课获奖教案省名师优质课赛课一.. 4页

初中地理日本市公开课获奖教案省名师优质课赛.. 4页

创意坊活动市公开课获奖教案省名师优质课赛课.. 5页

分类数学小班市公开课获奖教案省名师优质课赛.. 6页

2024年交通安全责任承诺书模板5篇 7页

分数与除法市公开课获奖教案省名师优质课赛课.. 6页

分子的立体构型市公开课获奖教案省名师优质课.. 6页

冰糖葫芦小班市公开课获奖教案省名师优质课赛.. 4页

冬阳童年骆驼队优秀市公开课获奖教案省名师优.. 4页

冬天的雪市公开课获奖教案省名师优质课赛课一.. 5页

军训班会市公开课获奖教案省名师优质课赛课一.. 6页

市值管理方案 26页

税务干部晋升思想工作总结6篇 16页

2022年10月全国自考《综合英语(一)》真题及详.. 7页

岭南版小学美术四年级下册17 简形玩偶教案 4页

湖南常德德山楚墓发掘报告 杨桦 17页

完整版教你看立博赔率 9页

三效浓缩蒸发器操作规程 8页

基层人民武装部的历史沿革 24页

如何提高油井检泵作业质量 24页

军事+民兵爆破地雷教材.pdf 77页