文档介绍：复旦大学
博士学位论文
CTLA4Ig基因修饰的树突状细胞诱导哮喘免疫耐受的实验研究
姓名:张瑾
申请学位级别:博士
专业:儿科学
指导教师:陈超
2011-09-15
蛐奘蔚氖魍蛔聪赴盏枷庖吣褪艿氖笛檠芯中文摘要第一部分腺病毒转导蛐奘问魍蛔聪赴第二部分蛐奘蔚氖魍蛔聪赴奶逋夤δ苎芯目的:构建蛐奘蔚氖魍蛔聪赴鄄旎蜃5级允魍蛔聪赴硇偷挠跋臁方法:小鼠骨髓来源的细胞悬液,,体外培养臁9庋显微镜下观察细胞生长状况和形态学变化。流式细胞仪鉴定细胞表型,确定是否为树突状细胞及其成熟度。确定为树突状细胞后,与重组腺病毒以及卜跤∈保ü庀晕⒕倒鄄煜赴谀康幕虮泶铮魇较赴遣舛ㄗH效率。结果:⑿∈蠊撬枥丛吹南赴嘌天可见树突状细胞特征性的树枝状形态和细胞集落形成。⒘魇郊觳夥⑾サ南赴狢阳性的未成熟的;.%的细胞为赴サ南赴狢细胞;.%的细胞为察到树突状细胞内发出绿色荧光。流式细胞仪分析检测显示H韭饰.%。⒂胫刈橄俨《竞蚈共孵育小时后,流式细胞仪检测显示.%的细胞为赴サ南赴狢细胞;.%的细胞为赴结论:成功构建了蛐奘蔚氖魍蛔聪赴关键词树突状细胞蛐奘目的:研究蛐奘蔚氖魍蛔聪赴谔逋獾墓δ埽私釩转染对树突状细胞表达细胞因子.、.的影响以及对刺激赴罨鲋彻δ艿挠跋臁方法:分离和培养小鼠骨髓来源的。将体外培养斓氖魍蛔聪赴殖组,一组为组,一组为组,另外两组分别加入病毒滴度为×痬的駻和U组细胞分别共培养小时后,分离细胞和上清。上清用椒ḿ觳釯虸O赴糜诤虰痗小鼠外周血来源的淋巴细胞进行混合淋巴细胞反应。结果:基因转染树突状细胞后,促进树突状细胞分泌。基因转染树突状细胞后,,树突状细胞促馨拖赴鲋车哪芰ο陆赴、与重组腺病毒和卜跤∈焙螅ü庀晕⒕迪驴晒
第三部分新生小鼠回输蛐奘蔚氖魍蛔聪赴种瞥赡昶气道过敏性炎症结论:蜃H臼魍蛔聪赴弑泶颕捅泶颕,促赴鲋车哪力降低。:研究将蛐奘蔚氖魍蛔聪赴厥涓律∈螅鄄炱涠猿赡昶贠致敏/激发的小鼠气道炎症的影响,并探讨其发病机制。方法:以骨蛔⑸渲旅粜∈蟛⑽砘爰し⒌姆椒ㄖ谱飨P汀=獵基因修饰的树突状细胞回输给新生的/∈螅诔赡昶贠致敏/激发小鼠,观察蛐奘蔚氖魍蛔聪赴孕∈笃姥字⒌挠跋臁M椒ㄉ枇⒍哉兆稍ぷ椋砩枇⒖瞻锥哉兆椤⑾P妥椤Mü鄄旄髯樾∈驩激发时的表现、肺泡灌洗液嗜酸粒细胞比例和肺部病理切片改变了解小鼠气道炎症情况。椒ú舛ㄑG寮癇腎、.及水平。结果:腹腔注射致敏小鼠并雾化吸入激发的方法能成功制作哮喘模型。⑿生小鼠给予蛐奘蔚氖魍蛔聪赴飨约跚岢赡昶谙⒆鞯闹⒆础⒓跎俜泡灌洗液中嗜酸性细胞的生成和病理切片中的炎症表现。基因修饰的树突状细胞可以减轻成年期小鼠哮喘发作时的血清和肺泡灌洗液中健、蛐奘蔚氖魍蛔聪赴杉跚岢赡昶谛∈笙⒆、蛐奘蔚氖魍蛔聪赴商岣叱赡昶谛∈笱G逯蠭平。基因修饰的树突状细胞对成年期小鼠哮喘发作时血清和肺泡灌洗液中顾轿廾飨杂跋臁结论:新生小鼠给予蛐奘蔚氖魍蛔聪赴稍诔赡昶谑币种芆致敏/激发小鼠的气道炎症,使旅簦し⑿∈笱G錓皆龈撸档蚑细胞因子的分泌,对赴蜃拥姆置谖廾飨杂跋臁1狙芯课O脑し篮兔庖咧瘟铺峁了新的思路。关键词新生小鼠哮喘模型免疫耐受疶.
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缩略语英文简称英文全称中文全称腺病毒一种快速产生重组腺病毒的简易系统仅包含虻闹刈包含有虻重组腺病毒二甲基亚砜细胞毒性馨拖赴关抗原关抗原庖咔虻鞍抗原呈递细胞成熟树突状细胞髓样树突状细胞浆细胞样树突状细胞未成熟树突状细胞胎牛血清绿色荧光蛋白流式细胞术支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞树突状细胞异硫氰酸荧光素藻红蛋白
支气管哮喘是儿童时期常见的慢性疾病,国际儿童哮喘及过敏性疾病研究协会鞑榉⑾植煌厍幕疾÷视泻艽蟛钜臁D壳叭蛳颊已有冢一疾÷屎筒∷缆食手鹉晟仙魇啤‘俊Hü葡髯槎年与年我国儿童支气管哮喘患病率的调查比较发现,年间,儿童哮喘患病率上升了.%旰攴直鹞狾.%【。美国儿童哮喘患病率每年上升%I虾J辍旰甓疾率分别为ァ.%、和ィ昴谏仙.%,与国内外报道相似【。逐年上升的发病率使哮喘已经成为严重危害健康和影响工作、学习的公共卫生问题,哮喘的早期诊断和防治己成为当前迫切需要解决的问题。支气管哮喘的发病机制探讨哮喘是由嗜酸性粒细胞和馨拖赴榷嘀细胞及其细胞因子参与的呼吸道变应性炎症性疾病,变应原在支气管哮喘发生发展中占重要地位。年,取慷年来哮喘的发病机制总结为闹芫仿窝怠闹芨叻从ρ岛兔庖哐Ю砺邸O喘的免疫