文档介绍：第二节免疫毒理试验中常用的方法
 
为鉴定外来化合物对免疫系统的毒性,必须建立一系列灵敏、特异、简便、快速的检测方法,大多数免疫毒理学家认为,要建立一组实验方法来评价免疫毒性。
一、病理学常规检查
病理学检查对于评价外来化合物对免疫功能的影响十分有用。外来化合物接触实验动物后,对免疫系统的毒性作用可表现为淋巴器官重量或组织学的变化、淋巴组织及骨髓的细胞量或质的变化和外周血淋巴细胞数改变。因此为了观察化学物质对免疫功能的影响,首先可对免疫器官进行大体解剖观察,如果发现胸腺重量下降和胸腺发生萎缩,就应着重检查细胞免疫功能;有人观察到动物接触已烯雌酚、TCDD或环磷酰胺,胸腺重量与细胞免疫功能状况呈很好的正相关。
二、淋巴细胞增殖反应试验
淋巴细胞增殖反应试验是测定T细胞和B细胞功能活性的简便方法,重复性也较好。
检测方法有形态学方法、同位素掺入法和颜色反应法。颜色反应法测定活细胞及增殖细胞转化程度简单、快速,在对一定数量细胞测定时,具有与同位素掺入法同样的灵敏度,是一种常用的方法。
三、体液免疫功能检测
有许多方法可用来检测体液免疫功能,包括抗体滴度、抗体形成细胞(PFC)及B细胞受体试验等。
抗体形成细胞试验是一种敏感而且常用的方法。通常用的抗原有绵羊红细胞(SRBC)、牛血清白蛋白(BSA)、卵白蛋白(0valbumin)、脂多糖(LPS)等。
用琼脂单向扩散法测定人血清免疫球蛋白的含量,虽不很敏感,但却是很常用的方法。
四、细胞免疫功能检测
细胞免疫功能主要由T细胞完成,细胞免疫担负着迟发型变态反应、移植排斥、肿瘤免疫等。
用来测定细胞免疫功能的方法有体内法(迟发型变态反应、移植物抗宿主反应、皮肤移植排斥反应)和体外法(淋巴细胞增殖、T细胞毒性及淋巴因子的产生)。
体内检测迟发型变态反应的方法应用较广,在一般情况下迟发型变态反应可以反映机体细胞免疫状况。原理是当致敏的T细胞再次接触相应的抗原后,就能引起局部的致敏淋巴细胞释放出多种淋巴因子,导致以单核细胞浸润为主的炎症反应,表现为皮肤红肿硬结。这种反应一般在抗原注射后24~48小时可以见到。
在人体检测迟发型变态反应可采用皮试法。皮试法中所用的抗原有特异性病原微生物性抗原,如结核菌素(OT)、白喉病毒、腮腺炎病毒等;还有非特异性抗原,如二硝基氯苯、二硝基氟苯及植物血凝素等。结果判定是根据硬结的纵横直径平均值,一般在5mm以上为阳性反应。
动物迟发型变态反应检测常用绵羊红细胞(SRBC)、牛血清白蛋白(BSA)、卵白蛋白(0valbumin)等。在用绵羊红细胞作为抗原时,一般致敏剂量为l x 108个细胞,致敏注射部位可在背部皮下注射或腹腔注射,经过5天后用l x 108个/20ul的SRBC注射一侧足掌,另一侧足掌注射生理盐水。24小时后用精密卡尺测量双侧足垫的厚度,并以双侧足垫厚度的差值来表示。
五、巨噬细胞功能试验
巨噬细胞在免疫反应中具有很重要的作用,它不仅有非特异性吞噬功能,还参与细胞免疫和体液免疫。巨噬细胞有多种功能,例如吞噬作用、胞内杀伤、抗原摄取和处