文档介绍：中山大学
硕士学位论文
miR-124a在小鼠内耳神经干细胞向神经元定向分化中的作用
姓名:蒋迪
申请学位级别:硕士
专业:耳鼻咽喉科学
指导教师:陈锡辉
20100525
谛∈竽诙窬上赴蛏窬定向分化中的作用中文摘要硕士研究生:蒋迪导师:陈锡辉主任医师感音神经性耳聋足临床常见病和多发病,严重影响人类健康及生活质量,临床上尚无理想的治疗方法,目前关于感音神经性聋的防治研究已成为临床研究的热点和难点之一。各种原因所致螺旋神经节细胞琒的凋亡和变性是感音神经性耳聋发牛的主要病理机理。属分化成熟的神经细胞,易受直接/间接因素的影响而发生死亡蛲龌蚧邓。由于再生能力非常低,因此,受损的保护与再生对恢复听力可能起重要作用。干细胞因具有连续增殖能力及定向分化潜能,有可能成为神经细胞损伤替代疗法之一。目前的研究业已证明成熟的哺乳动物内耳同样存在神经干细胞,只是处在不活跃状态。如何促使不活跃的内耳神经干细胞重新进入细胞周期,并向特定的神经元方向分化,是目前存在的关键问题。系列研究表明,控制干细胞增殖和分化的因素十分复杂,可能是多种因素共同作用的结果。悄谠葱缘拇笮≡的一类非蛋白编码ü氚衜’非翻译区域’,结合,介导基因转录后抑制。人类基因组编码的啻觯ü键靶基因的负向调节,在发育、分化中发挥重要的作用。在中枢神经系统,通过对靶基因效应元件反应结合蛋白珻的调控,抑制讣ざ鞍譸的翻译,从而调控神经的生长。匾斓乇泶镉诤B恚神经元的成熟有关,通过调节其靶基因峁褂蚣っ竘中山大学硕貉宦畚谛∈竽诙窬上赴蛏窬6ㄏ蚍只械淖饔
,参与树突及突触形成。而和特异地表达于神经祖细胞,通过调控转录激活因子琒牧姿峄降鹘谏窬5姆只毕碌饕种圃K怀聊B家蜃,表达水平以诱导非神经基因的下调。等的研究发现,∈笈咛チ鱿赴表达水平与分化神经元神经突起的数量密切相关,这一研究还发现在皮质神经元中,沉默或过表达陨窬M黄鹗恳嘤忻飨杂跋臁S纱可见,唤鲈谏窬低撤⒂⒎只芯哂兄匾5淖饔茫铱赡芡ü键靶基因的负向调节,参与神经细胞的自我更新或再生。由于海马与听觉系统存在内在的联系,因此我们设想:赡茉谀诙神经干细胞向神经元定向分化过程中同样起重要作用。为了证实这一假说,我们利用文献调查和生物信息学预测相结合,选取隹赡苡肽诙窬上赴向分化有关的J笛槟谌荩ü凳倍縋琿检测其在内耳神经干细胞定向分化过程中的表达水平,选择其中表达差异最大的Q芯慷韵螅鄄炱湓谀诙窬上赴蛏窬6ㄏ蚍化过程中的作用。实验一新生小鼠内耳神经干细胞培养模型的建立及定向诱导分化目的:建立新生小鼠内耳神经干细胞模型,探讨其体外定向诱导分化的可能性。方法:掷胄律惶煨∈笪现幔⒗胄摹⑾吹印⒋荡颉⒐恕⒓剖又钟谖血清培养液/嘌诤珺:篿痬,置于培养箱内培养七天,形成从一个单细胞克隆扩增而成的实心球后,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞的特异性标记物、,并且通过掺入的实验,检测实心球增殖活性。占谠鲋撑嘌褐信嘌咛斓氖敌那颍又钟诙嗑劾蛋彼岷筒阏沉鞍装被的盖玻片上,分化培养液分化培养十四天,采用免疫荧光的方法,检测神经元特异标志,观察其分化特性。结果:中山人学硕士学位论文谛∈竽诙窬上赴蛏窬6ㄏ蚍只械淖饔畇痬
实心球。免疫荧光染色显示,∈笪现岱掷肱嘌脑赴傻ハ赴刺欢戏至言鲋常纬尚〉.,⑾赴驳鞍约癝得悬浮的实心球具有神经干细胞特征。盏挤只纳窬Iぷ刺茫黄鸾恢赏只奶齑锔叻澹/的细胞可分化为表达阳性的神经元。实验二在内耳神经干细胞向神经元定向分化中的作用目的:利用文献调查和生物信息学预测相结合,选取隹赡苡肽诙窬上胞定向分化有关的J笛槟谌荩觳庹饬鰉在内耳神经干细胞向神经元定向分化过程中的表达水平,选择其中表达差异最大的Q究对象,观察其在内耳神经干细胞定向分化过程中的作用。方法:分离培养新生小鼠的内耳神经干细胞七天形成干细胞球后,分别接种于多聚赖氨酸和层粘连蛋白包被的盖玻片上贴壁分化三天和十四天,提取收集分子量小于男》肿覴,采用定量椒詓做为内对照,检测鰉在内耳神经干细胞定向分化不同时间点的表达水平,选取作为研究对象,通过电转染技术在内耳神经干细胞中沉默或过表达鄄炱涠阅诙窬上赴ㄏ蚍只及分化神经元轴突生长的影响。结果:定量允緈一在内耳神经干细胞向神经元定向分化过程中有显著的差异性表达;电转过表达后,可促进内耳神经干细胞向神经元方向分化以及分化神经元轴突的生长,电转聊琺蠖阅诙窬上赴蛏窬7较蚍只约胺只窬轴突的生长有抑制作用。结论:律∈竽诙锌煞掷肱嘌錾窬上赴⒖捎盏级ㄏ蚍只I窬!。关键词:⑿∈蟆⒛诙窬上赴⑸窬!⒍ㄏ蚍只中山大学硕士学位论文谛∈竽诙窬赴蛏窬6ㄏ蚍只械淖饔
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