文档介绍：DNA提取及PCR扩增实验报告
LT
PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳
刘琳 1131428 环境科学
一、实验目的
1．学****并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
2．对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。
二、实验原理
1. PCR扩增
多聚酶链反应（PCR）技术的原理类似于DNA的天然复制过程。在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板DNA、四种脱氧核苷酸（dNTP）、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA的引物，而后加热使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链解链，这是所谓变性阶段。降低溶液温度，使合成引物在低温（55℃）与模板DNA互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。溶液反应温度升至中温（72℃），在Tap酶作用下，用四种dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链，这是延伸阶段。如此反复，在同一反应体系中可重复高温变性、低温
退火和DNA合成这一循环，使产物DNA重复合成，并在重复过程中，前一循环的产物DNA可作为后一循环的模板DNA而参与DNA的合成，使产物DNA的量按指数方式扩增。经过30～40个循环，DNA扩增即可完成。
2. DNA琼脂糖凝胶电泳实验
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。不同构型的DNA分子的迁移速度不同。该电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
三、实验材料
仪器：PCR扩增仪、、、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、水平电泳槽、制胶版、紫外透射仪。
试剂： TapDNA聚合酶、dNTP、buffer、两种引物、16S全长DNA样本、无菌ddH2O、模板
DNA 、TBE、琼脂糖、EB、显色剂。
实验步骤
1. PCR扩增
本次试验选择细菌16S rDNA V3区片段进行扩增。
根据计算， 10×Buffer 、1 ul dNTP、 ul 341GC、 ul 534、 ul Taq、 ddH2O的比例配置足量的PCR反应体系。
分别向9个薄壁管中分别加入24 ul的反应体系，并分别添加8种不同的模版，并于第9个薄壁管中加入无菌ddH2O作为阴性对照。
将薄壁管放入PCR扩增仪中，按照预定程序进行PCR扩增。其中循环过程需要达到30~40次。程序如下：
预变性： 94℃ 3min
循环： 94℃ 变性30s
55℃ 退火30s
72℃ 延伸30s
末次延伸：72℃ 5min
PCR扩增完成后，将样品取出并保存于15℃环境中。
2. DNA琼脂糖凝胶电泳实验
，放到一锥形瓶中，×TBE电泳缓冲液。然后置