文档介绍：关于分光光度计的使用
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分光光度法的概念
分光光度法：是利用物质特有的吸收光谱，进行物质鉴定及测定其含量的一种分析技术。也称为吸收光谱法。是光谱分析技术中最常见的一种，应用最多的是紫外及可见分光光度法。
特点：灵敏、精确、快速和简便。
应用：生物化学微量物质定量分析测定研究中广泛使用的方法之一，常用于糖，蛋白质，核酸，酶等的快速定量检测。
光谱范围：200～1000nm 。
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分光光度法的概念
红外分光光度计:大于760 nm的红外光区
可见光分光光度计:400～760 nm的可见光区
紫外分光光度计: 200～400 nm的紫外光区
分光光度计的分类
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722E可见分光光度计
第四页，本课件共有17页
722E可见分光光度计
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分光光度计的基本结构
光源
单色
光器
吸收池
检测 系统
钨丝灯
氢灯
氘灯
棱镜
衍射光栅
玻璃比色杯
石英比色杯
硒光电池
光电管
光电倍增管
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当一束单色光透过溶液时
部分被吸收
部分被反射
部分被透过
Ir
Ia
I
入射光
I0
出射光
I
比色皿 吸收杯
反射光
Ir
Ia
吸收光
分光光度计基本原理
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Ｉ/ I0表示光线透过溶液的程度,称为透光度,用T表示；－IgT表示溶液对光线的吸收程度，用吸光度（A）表示。即
I0
C
I
A＝－IgT ＝－Ig
I
I0
←L →
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Lambert-Beer定律（光吸收定律）
Lambert定律：A＝K1L
Beer定律：A＝K2C
Lambert-Beer定律：当一束单色光垂直通过一均匀的溶液时，溶液的吸光度A，与溶液的浓度C及溶液的厚度L成正比。即
A＝KCL
其中：A－吸光度
K－为消光常数，表示物质对光线吸收的能力，受物质种类和光线波长的影响
C－溶液的浓度
L－溶液的厚度
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