文档介绍：实验四细菌的生理生化试验及肠杆菌科的鉴别、理化因素及生物因素对微生物的影响
一、目的要求
掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理、方法、结果判定以及在诊断中的运用
熟悉大肠杆菌和沙门菌主要培养特性和常规微生物学诊断方法
通过本实验加深理化因素及生物因素对微生物的影响的概念
二、实验材料
菌种:大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巴氏杆菌
培养基:葡萄糖高层琼脂、普通琼脂斜面、水琼脂斜面、氧化-发酵培养基(小生化管)、普通平板、麦康凯平板、淀粉平板、三糖铁斜面、各类生化反应管等
器械:砂轮、试管架、接种环、接种针、灭菌吸管、灭菌刻度移液管、灭菌棉签、胶头、灭菌液体石蜡、酒精灯、废报纸等
三、实验内容
1、细菌对空气(氧气)的需要
菌种:大肠杆菌、枯草杆菌
方法:用吸管将两种菌各加入两支己溶化的葡萄糖深层琼脂管中,
培养基:葡萄糖深层琼脂(己溶化)
2、细菌对营养的要求
菌种:大肠杆菌、巴氏杆菌
培养基:斜面(水琼脂、普通琼脂)
方法:划线的方法
(一)细菌的生理生化试验
3、细菌氧化型与发酵型(O/F)的测定
菌种:大肠杆菌、枯草杆菌
培养基:加有葡萄糖和指示剂(1%溴麝香草酚蓝)的微型发酵管
方法:用接种针将两种菌各加入两支发酵管中,从不同菌里各取一管加入灭菌的液体石蜡,37 ℃正置培养。
产酸(浅绿色黄色)
4、淀粉水解试验
菌种:大肠杆菌、枯草杆菌
培养基:普通营养琼脂平板
方法:一块平板上,一边划大肠杆菌,一边划枯草杆菌,第二天长出菌后,在菌落上滴加碘液。
5、触酶(过氧化氢酶)试验
菌种:大肠杆菌、枯草杆菌
培养基:普通营养琼脂平板
方法:一块平板上,一边划大肠杆菌,一边划枯草杆菌,第二天长出菌后,在菌落上滴加H2O2
(二)肠杆菌科的鉴别(大肠杆菌&沙门菌)
肠杆菌科的生化试验
1、麦康凯琼脂平板
(乳糖、胆盐、指示剂:1%中性红)
方法:划线,分解乳糖菌落变红
2、三糖铁琼脂斜面
(葡萄糖、蔗糖、乳糖、硫酸亚铁铵、指示剂:%酚红)
方法:先划斜面再穿刺
3、糖分解试验
微量发酵管:葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖
方法:用接种针挑取菌种后接入发酵管内,用报纸包好口,置培养箱培养。发酵糖产酸:指示剂溴甲酚蓝由紫色黄色
4、吲哚(靛基质)试验
培养基:蛋白胨水微量管
原理:细菌分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚,吲哚与对位二***氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而成红色。
方法:接种针接种,培养12-24 h后,加入试剂显色