文档介绍：植物病理学报
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个小麦类抗病基因同源
序列的克隆与鉴定
王海燕,刘大群,杨文香,李在峰,张立荣,张娜
河北省农作物病虫害生物防治丁程技术研究中心,河北农业大学植物保护学院,保定
摘要:利用末端快速扩增技术对小麦抗叶锈病近等基因系中所获得的抗病基因同源片段端和末
端序列进行扩增,并根据拼接序列设计特异性引物,进行全长基因的扩增,获得了个通读的类抗病同源基因
序列,该序列全长为,编码个氨基酸序列。经比较,该片段含有—保守结构域和多个
结构域,与已知植物抗病基因/一、、等相应区域相一致。半定量—分析表明,该基因在小麦叶片中为
低丰度组成型表达。本研究存小麦中成功获得了抗病同源基因,这为最终克隆小麦抗叶锈病基因奠定了基础
关键词:小麦抗叶锈病基因;末端快速扩增技术;同源序列

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中图分类号:.. 文献标识码: 文章编号:

要的粮食作物。小麦叶锈病是由专性寄生真菌小寄主之间相互作用机制具有重要意义。目前,人们
麦叶锈菌引起的最严重的小麦已经从玉米、拟南芥、水稻、小麦、大麦等植物中成
叶部病害之一,严重危害着小麦生产,在世界各产功克隆了多个抗病基因。已克隆的植物抗病
麦区均有发生。筛选和培育抗病品种是防治基因在氨基酸水平上表现了一定程度的相似性,在
小麦锈病最为安全、经济和有效的方法。而抗病基一些区段高度保守,大部分植物抗病基因编码
收稿日期:—;修回日期:
基金项目:河北省自然科学基金;河北省教育厅;国家自然科学基金
通讯作者:刘大群,教授,主要从事分子植物病理学研究;:...
第一作者:王海燕一,女,博士,河北遵化人,主要从事分子植物病理学研究;—:..。
植物病理学报卷
—类抗病蛋白,。小麦不仅基因组庞大的回交代近等基因系材料;感病亲
.,相当于水稻基因组的近倍,且本;供试菌株—对表现
重复序列含量丰富,这些特点使得研究人员寻找小高毒力,对表现无毒力。植物材料和病
麦抗病基因区段两侧的分子标记比较困难,增加了原菌均由河北农业大学小麦锈病研究室收集保存。
染色体步移或重叠克隆群构建的难度。抗病基因
. 小麦叶片总的提取
同源片段的克隆、定位及其与已知抗病基因的连锁
小麦在温室生长至六叶期接菌鉴定,剪取叶
分析,为克隆小麦抗病基因提供了新的思路。
片,总提取采用上海生工的柱式
到目前为止,人们对小麦抗叶锈病基因遗传和
总抽提试剂盒。用紫外分光光度计检
抗病性已经进行了多方面的研究,国际上已发现
测浓度并用琼脂糖凝胶电泳检测的完
多个抗叶锈病基因,正式定名的有个,它们
整性。
中有多个已被标记在特定染色体上,其中有
个抗叶锈病基因借助于、、和. 引物设计
技术标记成功。目前国内外成功克隆到的
.. 一引物以小麦抗病基因同源片段
小麦抗叶锈病基因有、。、】。。和
为靶序列,在其末端设计条正向基因
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。中国拥有丰富的小麦抗叶锈资源,但对
特异引物: