质粒DNA的提取、酶切及其琼脂糖凝胶电泳实验报告.docx

文档介绍：质粒DNA的提取、酶切及其琼脂糖凝胶电泳实验报告
质粒DNA的提取、酶切及其琼脂糖凝胶电泳实验报告
质粒DNA的提取、酶切及其琼脂糖凝胶电泳实验报告
实验序号
实验时间

实验名称

质粒

DNA

的提取、酶切及其琼脂糖凝胶电泳是否小组合作 是（√） 否（

）
一．实验预习
质粒DNA的提取、酶切及其琼脂糖凝胶电泳实验报告
质粒DNA的提取、酶切及其琼脂糖凝胶电泳实验报告
质粒DNA的提取、酶切及其琼脂糖凝胶电泳实验报告
1．实验目的：
质粒DNA的提取、酶切及其琼脂糖凝胶电泳实验报告
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1）通过本次实验学习和掌握碱裂解法提取质粒；
2）通过本次实验学习琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 的方法和技术；
2．实验原理：
1）质粒 DNA的提取：
1）关于质粒：
质粒是一类存在于几乎所有细菌中染色体之外（细胞质中）呈游离状态的双链、
闭环的 DNA分子。质粒通常携带有染色体上所不存在的能够表达产生抗生素、 耐受重金属等重要性状的基因。 细菌质粒的大小范围从 1kb 至 200kb 以上不等，且拥有自己的复制起始位点， 可不依赖于染色体而进行独立自主复制。 一些小的质粒利用宿主细胞的酶进行复制，而较大的质粒则自身携有复制与编码的有关酶。
2）一般分离质粒 DNA的方法都包括 3 个步骤：
①培养细菌，使质粒 DNA大量扩增；
②收集和裂解细菌；
③分离和纯化质粒 DNA。
分离制备质粒 DNA的方法很多，其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、 SDS 法、羟基磷灰石层析法等。 在实际操作中可以根据宿主菌株类型、 质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒 DNA的用途进行选择。（ 3）碱裂解法提取大肠杆菌质粒 DNA的原理：
碱裂解法提取质粒 DNA是根据共价闭合环状质粒 DNA和线性染色体 DNA在拓扑学上的差异来分离质粒 DNA。
在 pH 值介于 ~ 这个狭窄的范围内，线性的 DNA双螺旋结构解开而变性，尽管在这样的条件下， 共价闭环质粒 DNA的氢键会被断裂， 但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。当加入 乙酸钾高盐缓冲液恢复 pH 至中性时，共价闭合环状的质粒 DNA的两条互补链仍保持在一起， 因此复性迅速而准确；而线性的染色体 DNA的两条互补链彼此已完全分开， 因复性较缓慢且不准确而相互缠绕形成不溶性网状结构。 而复性的质粒 DNA恢复原来构型， 保持可溶性
状态。通过离心，染色体 DNA与不稳定的大分子 RNA，蛋白质 -SDS复合物等一起
沉淀下来而被除去，最后用酚氯仿可以抽提纯化上清液中的质粒 DNA。
2）质粒 DNA的琼脂糖凝胶电泳：
（ 1）关于电泳技术：
电泳常用于分离和纯化那些分子大小、 电荷性状或分个构象有所不同的生物大分子——尤其是蛋白质和核酸。 正因为如此，电泳已成为生物化学和分子生物