实验十的限制性内切酶酶切.ppt

文档介绍：实验十的限制性内切酶酶切
第1页，本讲稿共11页
一、实验目的
了解核酸限制性内切酶的特点及其对DNA的酶切过程
学会设计构建体外重组DNA分子的方法，并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及DNA的酶切技术
第2页，本实验十的限制性内切酶酶切
第1页，本讲稿共11页
一、实验目的
了解核酸限制性内切酶的特点及其对DNA的酶切过程
学会设计构建体外重组DNA分子的方法，并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及DNA的酶切技术
第2页，本讲稿共11页
二、实验原理
EcoRI限制性内切酶的识别与切割顺序为：
5’……G↓AATTC……3’
3’……CTTAA↑G……5’
Xhol I限制性内切酶的识别与切割顺序为：
5’……C↓TCGAG……3’
3’……TAGCT↑C……5’
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三、实验材料
仪器：水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、各式移液枪、核酸紫外检测仪等。
、移液枪枪头等。
DNA样品：上一个实验获得的质粒DNA
限制性内切酶Xhol I和EcoR I（Takara）
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四、实验步骤
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酶切体系：
质粒DNA 5ul
EcoRⅠ 1ul
Xhol Ⅰ 1ul
2×Buffer H 2ul
Sw 11ul
Total 20ul
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用微量移液枪（20微升）依次吸取
SW
10倍酶切缓冲液
DNA
EcoR I
Xhol I
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，在振荡器上充分混匀2秒钟，立即于离心机内离心一下，以将管壁上的液体集中于管底。
将离心管放置37℃水浴锅中反应3小时。在酶切反应的同时，%的琼脂糖凝胶，并准备好电泳装置。
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五、实验结果
根据电泳结果，描述酶切的结果与效果。
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M 1 2
←4900bp
←1518bp
Analysis of recombinant expression vector with restriction enzyme
M. DNA Marker(Lambda DNA/Hind III+EcoR I Markers)
1. pGEX 6p-1-hly/BamH I/Xho I
2. pGEX 6p-1 / EcoR I
重组质粒pGEX 6p-1-hly酶切结果
bp
19329
6223
1489
4254
2590
7743
1882
3472
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