文档介绍：华中科技大学
硕士学位论文
不同缓冲体系对hemin催化蛋白质硝化和蛋白质氧化的影响
姓名:李雪犁
申请学位级别:硕士
专业:无机化学
指导教师:高中洪
20080605
华中科技大学硕士学位论文
摘要
蛋白质酪氨酸硝化,是一种普遍存在的蛋白质翻译后修饰,是机体在氮氧化物
存在条件下氧化损伤的特殊形式。蛋白质硝化的同时,也会伴随蛋白质氧化。硝化
和氧化作用能造成蛋白质结构以及功能的改变,已在许多生理和病理状态下检测到
它们的存在。
本文采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)、分光光度法(spectrophotometry)
和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对hemin-NaNO2-H2O2体系
在五种生物化学和细胞生物学研究中常用的缓冲溶液:碳酸缓冲液(NaHCO3-CO2)、
Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液(PBS)、柠檬酸(Citrate-Citric acid)和Hepes缓冲液
中引起的蛋白质硝化和蛋白质氧化作用进行了比较,并测定其硝化作用和氧化作用
与pH值的关系。实验结果表明,在五种缓冲溶液中,氯高铁血红素(hemin)均能够
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有效催化NO2 -H2O2体系引起的牛血清白蛋白(BSA)的硝化和氧化,并且其导致的
BSA硝化程度和氧化程度随pH值变化趋势相反:硝化程度随pH值的升高而降低;氧
化程度随pH的升高而升高。在相同pH值()情况下,五种缓冲溶液中,BSA的硝
化、氧化程度也有差异:Tris-HCl溶液中硝化作用最强,PBS、Citrate-Citric acid、
NaHCO3-CO2缓冲体系次之,而在Hepes体系中硝化程度最弱。进一步研究表明,不
同缓冲溶液可能通过对亚硝酸盐的氧化的抑制而降低硝化。NaHCO3-CO2和PBS缓冲
溶液中氧化作用最强,Citrate-Citric acid溶液,Tris-HCl溶液次之,在Hepes溶液中氧
化程度最小。
上述研究结果表明,不同缓冲溶液对hemin-NaNO2-H2O2引起的蛋白质硝化和氧
化程度不同,酸性条件下有利于蛋白质酪氨酸硝化,而碱性条件有利于蛋白质氧化。
值得注意的是,Hepes缓冲溶液中,氧化和硝化程度均不高,提示在进行细胞或其他
体外氧化实验时,尽量不要用Hepes作为缓冲剂,以免影响研究结果的正确性。

关键词:蛋白质硝化; 蛋白质氧化; 氯高铁血红素; 亚硝酸盐; 缓冲溶液; pH值
I
华中科技大学硕士学位论文
Abstract
Protein tyrosine nitration, a ubiquitous post-translational modification, is a special form of
oxidative damage. Protein oxidation occurred in parallel with protein tyrosine nitration, can be detected
by the increase of carbonyl. Protein tyrosine nitration and oxidation which could regulate protein
structure and function have been found under conditions of nitrative/oxidative stress in a number of
physiological and pathologic states.
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In this thesis, the effect of different buffers and pH on hemin-NO2 -H2O2 system induced bovine
serum albumin (BSA) nitration and oxidation was studied by using Western blotting,
spectrophotometry and SDS-PAGE. The buffers including NaHCO3-CO2, Tris-HCl, PBS, Citrate-Citric
acid and Hepes, which monly used in biochemistry and cell biology, were chosen. The results
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showed that BSA could be nitrated and oxidized by hemin-