DNA提取方法.doc

文档介绍：可编辑可修改
从动物组织提取基因组 DNA
一、材料
哺乳动物新鲜组织。
二、设备
移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。
三、试剂
可编辑可修改
从动物组织提取基因组 DNA
一、材料
哺乳动物新鲜组织。
二、设备
移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。
三、试剂
1、分离缓冲液： 10mmol/L Tris ·Cl , 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA 。
2、其它试剂： 10% SDS， 蛋白酶 K (20mg/ml 或粉剂 ) ， ***，酚 : ***仿 : 异戊醇
(25:24:1) ，无水乙醇及 70%乙醇， 5mol/L NaCl ， 3mol/L NaAc ， TE。
四、操作步骤 :
切取组织 5g 左右 , 剔除结缔组织 , 吸水纸吸干血液 , 剪碎放入研钵 ( 越细越好 ) 。
倒入液氮 , 磨成粉末 , 加 10ml 分离缓冲液。
加 1ml 10% SDS, 混匀 , 此时样品变得很粘稠。
4.
加 50ul 或 1mg 蛋白酶 K, 37
℃保温 1-2 小时 , 直到组织完全解体。
5.
加 1ml 5mol/L NaCl,
混匀 ,5000rpm 离心数秒钟。
6. 取上清液于新离心管，用等体积酚
: ***仿 : 异戊醇 (25:24:1)
抽提。待分层后
,3000rpm 离
心5 分钟。
取上层水相至干净离心管 , 加 2 倍体积***抽提 ( 在通风情况下操作 ) 。
移去上层*** , 保留下层水相。
9. 加 1/10 体积 3mol/L NaAc, 及 2 倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀 DNA。室温下静止 10-20 分
钟， DNA 沉淀形成白色絮状物。
10. 用玻棒钩出 DNA 沉淀 ,70% 乙醇中漂洗后 , 在吸水纸上吸干 , 溶解于 1ml TE 中 ,