文档介绍：第三军医大学硕士学位论文 6 PPAR γ上调 c-Ski 表达及其机制初探摘要研究背景: 动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS) 严重危害人类健康,其所导致的心脑血管疾病给人们带来了身体上和精神上的痛苦,也给社会带来了沉重的经济负担,研究 AS 发生发展的分子机制是治疗 AS 的前提和关键。在 AS 发生发展的诸多分子机制中, 过氧化物酶体增生物激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptors, PPAR γ) 作为一类配体激活的核受体,其作用得到了充分的证实。 PPAR γ能够影响血脂平衡, 改变能量代谢,调节炎症反应,并且在泡沫细胞形成以及血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC) 增殖和胶原分泌中发挥作用,但是具体作用机制并不清楚。而 TGF β/smad 是另一个在 AS 发生发展中发挥重要作用的信号通路,它通过 smad 途径促进 VSMC 的增殖和胶原分泌。 c-Ski 作为该信号通路的阻遏子能阻断该途径的信号传导,其机理是与 smad3 的 MH2 结构域结合从而阻止转录复合物形成以及募集辅阻遏子。这些研究背景提示 c-Ski 作为 TGF β/smad 通路阻遏子可能在 AS 的发生发展中发挥重要作用,但是关于 c-Ski 在 AS 中的具体作用以及是否与 PPAR γ之间存在相互调节的联系尚无报道。弄清该问题,可以阐明二者在 AS 中的相互作用以及机制, 为治疗 AS 提供新的思路和策略。研究目的: 明确 AS 中 PPAR γ与 c-Ski 的相互联系和对 AS 的影响。研究方法: 通过高脂饮食制作大鼠 AS 模型,检测 AS 斑块中 c-Ski 的 mRNA 及蛋白的表达变化; 在体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC) 中转染重组 c-Ski 质粒, 并观察其对 VSMC 增殖及胶原分泌的影响; 采用 real-time PCR 和 Western blot 检测 PPAR γ激动剂和拮抗剂对 c-Ski 表达的调节,进而利用在线程序 NUBIScan 及荧光素酶报告基因检测明确 PPAR γ对 c-Ski 的调控机理。研究结果: (1) AS 大鼠动脉斑块中 c-Ski mRNA 和蛋白表达显著降低。(2) 重组 c-Ski 质粒转染 VSMC 后显著抑制大鼠 VSMC 增殖及胶原分泌。(3) PPAR γ激动剂罗格列酮可明显上调大鼠 VSMC 中 c-Ski 表达, 且这种上调可以被 PPAR γ拮抗剂 GW9662 所阻断。(4) 生物信息学分析表明 c-Ski 启动子区有可能的 PPAR γ结合位点,而罗格列酮第三军医大学硕士学位论文 7 也能显著上调转染了 c-Ski 启动子的报告基因表达。结论: c-Ski 具有一定抗 AS 作用,其可能是 PPAR γ的又一靶基因,激活 PPAR γ可上调 c-Ski 而发挥抗 AS 作用。关键词: 氧化物酶体增殖物激活受体γ; c-Ski ;动脉粥样硬化;血管平滑肌细胞第三军医大学硕士学位论文 4 PPAR γ up-regulates TGF β/smad signal pathway repressor c-Ski Abstract Background: Cardiovascular and cerebrovascular diseases caused by atherosclerosis (AS) are harmful to the health of humanity . The function of peroxi some proliferators activated receptors γ(PPAR γ) is very critical in the molecule s that regulate the process of AS. PPAR γ,activated by ligands,is a type of nuclear receptor which can influence the forming of the foam cells,proliferation and collagen secr etion of vascular smooth muscle cells(VSMC) by means of regulating the ba lance of blood-fat,energy me tabolism and inflammation. Although it is closely related to the