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生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级：
组别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
响与同样处理的葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法〔直接比拟法〕即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先臵于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保存肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意
1、材料：
〔1〕样品：鸡肝
〔2〕试剂：95%乙醇、5%〔W/V〕三***乙酸、浓盐酸、〔50%〕NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、〔30%〕KOH溶液、标准葡萄糖液〔50mg/L〕、蒽***显色剂
〔3〕仪器和器材：普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管〔2ml、5ml〕、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反响板
2、方法：
〔1〕肝糖原的提取与鉴定
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混匀
糖原水解液
呈色比照
+50%NaOH 5滴
+浓HCL5滴
沸水浴15min，冷却
加碘试剂2滴
加碘试剂2滴
糖原溶液2滴
沸水浴2min，溶解沉淀
沉淀〔弃去〕
鸡肝约1g，剪碎
+5%CCl3COOH 1ml
研磨至乳状
+5%CCl3COOH 3ml
研磨成肝匀浆
全部转入离心管中，离心3min〔4000r/min〕
上清液〔取2ml〕
离心5min〔4000r/min〕
+2ml 95%乙醇，混匀，静置10min
沉淀
上清液〔弃去〕
白瓷板孔穴中
糖原溶液1ml
糖原水解液2滴
+班氏试剂4滴
沸水浴2min，观察变化
〔2〕肝糖原定量测定
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+30%KOH 〔用吸量管〕
在分光光度计620mm波长处，用空白管溶液调零，测定并记录各管溶液的吸光度〔A〕
沸水浴10min，冷却
加水至标线，仔细混匀，获得糖原提取液
冷却，全部转入100ml容量瓶中
沸水浴15min
取3支试管，分别标记为空白管、标准管、样品管
%蒽***，混匀
四、结果与讨论：①结果：实验数据、现象、图谱；②讨论：以结果为根底的逻辑推论，并得出结论。
1、结果：
〔1〕实验现象：
1〕肝糖原的提取与鉴定
第一次离心后，肝匀浆分为2层，上层为上清液，不完全澄清，下层为淡褐色沉淀。
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图1 肝匀浆图2 肝匀浆第一次离心后
参加乙醇混匀并静置后，溶液分层，上层为上清液，下层有白色絮状沉淀。
第二次离心后，溶液分为2层，上层为上清液，试管底部有少量白色沉淀。
图3 第二次离心后的白色沉淀
④参加蒸馏水并沸水浴后，白色沉淀溶解。
⑤白瓷板上，糖原溶液加碘试剂后呈红棕色，与碘自身的黄色有明显区别。
碘试剂2滴
糖原溶液2