文档介绍：生物化学实验报告
姓名:

学号:

专业年级:

组别:
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
肝糖原的提取、鉴定与定量
实验日期

实验地点

合作者

指导老师

评分
XX
教师签名
李某某
批改日期
2013-06-03
格式要求:正文请统一用:小四号,宋体,;数字、英文用Times New Roman;标题用:四号,黑体,加粗。需强调的地方请用蓝颜色标出。不得出现多行、多页空白现象。
实验目的
1、掌握组织样品的制备方法,了解其注意事项。 
2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽***比色测定糖原含量的原理和注意事项,掌握其操作方法。 
3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4、熟练运用溶液混匀的各种方法。 
5、正确掌握溶液转移的操作。 
6、正确操作使用分光光度计。
实验原理
1、肝糖原的提取与鉴定
糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三***醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。
  
CuSO4十2NaOH = Na2SO4+Cu(OH)2↓  
2Cu(OH)2十C6H12O6 = 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O  
2CuOH = Cu2O↓(红色)+H2O  
Cu(OH)2= CuO↓(黑色)+H2O
2、肝糖原定量测定
糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟***呋喃甲醛,此化合物再与蒽***脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在620nm处有最大吸收。糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法(直接比较法)即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。
三、材料与方法:以流程图示意
1、材料:
(1)样品:鸡肝
(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三***乙酸、浓盐酸、(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽***显色剂
(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板
2、方法:
(1)肝糖原的提取与鉴定
混匀
糖原水解液
呈色对比
+50%NaOH 5滴
+浓HCL5滴
沸水浴15min,冷却
加碘试剂2滴
加碘试剂2滴
糖原溶液2滴
沸水浴2min,溶解沉淀
沉淀(弃去)
鸡肝约1g,剪碎
+l3COOH 1ml